雞脾轉(zhuǎn)移因子的研制、檢驗規(guī)程及其應(yīng)用.pdf

1、本文就雞脾轉(zhuǎn)移因子(Transfer Factor，TF)的研制、檢驗規(guī)程的制定以及應(yīng)用等三個方面進行詳細闡述，旨在明確雞脾TF的理化特性及免疫學特性，結(jié)合臨床應(yīng)用效果制定出TF的質(zhì)量控制標準，為雞脾TF在臨床推廣應(yīng)用提供理論依據(jù)。 試驗比較了5批不同批次雞脾TF的理化特性及組分的變化情況，并與4批豬脾TF做了比較，結(jié)果顯示不同批次和不同來源的TFpH值均在6.1-6.7之間，為微黃色或淺黃色液體，鑒別反應(yīng)中茚三銅反應(yīng)呈紫色，蛋

2、白質(zhì)定性試驗呈陰性，核苷酸與多肽比值為2.0以上。高效液相凝膠層析結(jié)果顯示不同批次不同來源的TF均含有相同的三個大組分；不同批次的產(chǎn)品穩(wěn)定性較好，具有良好的重現(xiàn)性。以分子量為5800的胰島素標準品作對照，按面積歸一化法計算小于胰島素峰保留時間的峰面積占全部峰面積的百分數(shù)，以此判斷超過分子量5800的高分子物質(zhì)所占的比例。結(jié)果顯示在雞脾TF中該比例均小于0.03％，豬脾TF中均小于0.2％，均達到分子截流5000的標準，因此可以將小于胰島

3、素峰保留時間的峰面積作為判定雞脾組分分子量是否達標的質(zhì)控標準之一。 試驗同時檢測了TF游離氨基酸和水解氨基酸含量，結(jié)果顯示TF水解氨基酸和游離氨基酸之間在氨基酸含量和種類上存在較大差異，但不同批次和不同來源的水解氨基酸具有類似的峰形走勢，但游離氨基酸則不同批次，不同來源之間存在一定差異，表現(xiàn)在氨基酸種類和含量的差異。由于水解氨基酸樣品處理過程申存在小肽被破壞的現(xiàn)象，易造成結(jié)果的不準確，因此水解氨基酸不作為質(zhì)控標準，但可以將游離氨

4、基酸總和作為判定標準。結(jié)果顯示無論來源或批次的不同，每1mlTF中含游離氨基酸的量均超過2mg。 采用sephadex G-25柱層析的方法分離雞脾轉(zhuǎn)移因子三個組分，通過環(huán)磷酰胺建立小鼠免疫抑制模型，用MTT比色法檢測雞脾TF三個分離組分及TF原液對免疫抑制鼠及正常鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的影響。同時比較了不同來源雞脾和豬脾TF各組分及原液對正常小鼠的淋巴細胞轉(zhuǎn)化率的作用。結(jié)果表明TF三種組分及原液均對免疫抑制小鼠的外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率

5、具有明顯的增強作用，表現(xiàn)差異顯著(P<0.01)，其中組份Ⅲ的淋巴細胞轉(zhuǎn)化率最佳，組份Ⅰ與組份Ⅱ接近，但均優(yōu)于原液。 而對正常小鼠的外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化率卻表現(xiàn)不同的結(jié)果，其中組分Ⅰ和原液具有顯著的免疫增強作用(p<0.05)，組分Ⅱ作用不顯著，組分Ⅲ則起到極其顯著的抑制作用(p<0.01)。而不同來源的豬脾TF各組分及原液對正常小鼠的淋巴細胞表現(xiàn)出與雞脾一致的免疫活性。不同于人脾TF中組分Ⅰ起免疫抑制、組分Ⅲ起免疫促進作用的報道

6、，有待進一步研究。但無論在免疫抑制小鼠或正常小鼠外周血淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗中，TF原液均起到促進作用，建議臨床使用原液優(yōu)于提純。 生產(chǎn)上分別采用超濾法和透析法兩種不同工藝生產(chǎn)12批不同批次的雞脾TF。比較不同工藝、不同保存溫度、保存時間對多肽及核糖含量的影響，了解影響產(chǎn)品穩(wěn)定性因素，確定生產(chǎn)、貯存過程中TF質(zhì)量控制指標。結(jié)果顯示超濾法較透析法更好地應(yīng)用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。而透析法由于穩(wěn)定性差，不適合規(guī)模生產(chǎn)，采用透析法應(yīng)考慮流速對多

7、肽和核糖含量的影響，將最佳流速控制在70ml/min。隨著保存時間的延長，多肽及核糖含量會下降，TF最佳貯存溫度4℃優(yōu)于-20℃，建議保存時間不應(yīng)超過12個月。 動物免疫效果試驗比較了單獨使用雞脾TF與疫苗聯(lián)合使用，在不同劑量、不同使用時間的情況下對肉雞增重、死淘率、淋巴細胞比率、免疫器官指數(shù)、巨噬細胞吞噬指數(shù)的影響。結(jié)果表明，臨床使用的雞脾TF多肽含量應(yīng)控制在1mg/ml(而生產(chǎn)的TF多肽含量應(yīng)超過該指標)。當雞群處于健康狀態(tài)

8、時TF對日增重、死淘數(shù)影響不大，而處于亞健康狀態(tài)雞群使用0.5ml，多肽含量為1mg/ml的TF可以明顯提高雞群日增重、降低死淘率，與疫苗組效果相當，甚至提高日增重和提高巨噬細胞吞噬指數(shù)方面優(yōu)于疫苗組。試驗還發(fā)現(xiàn)疫苗對機體具有好的免疫保護作用和促長作用。而疫苗加TF組和疫苗組相比雖然差異不顯著，但某些指標上優(yōu)于疫苗組。臨床建議處于亞健康狀態(tài)的家禽使用雞脾TF以提高機體抗病力，可與疫苗免疫同時使用，臨床飲水使用的最佳劑量為0.5ml。

9、 試驗比較了TF在萬只商品肉雞場的臨床預(yù)防效果試驗，結(jié)果顯示TF具有提高雞只增重，降低死亡率和延遲雞只發(fā)病時間的作用。同時比較了TF在標準試驗場及普通用戶養(yǎng)殖場的預(yù)防及治療效果試驗(部分摘錄15個試驗報告)，試驗涉及肉雞、蛋雞、雜交雞和肉鴨。結(jié)果表明TF具有較好的防病效果和改善生產(chǎn)性能的作用，臨床將TF與其它抗生素或化藥配合使用具有較好的治病效果，與常規(guī)藥物治療相比，具有治愈率快，縮短療程的作用。試驗同時比較了TF與抗病毒中藥配伍使

10、用臨床預(yù)防效果，分別比較了肉小雞階段(0-21日齡)，肉中級階段(22-3日齡)和肉大雞階段(36-42日齡)及1-42日齡的雞只體重變化、料重比及育肥指數(shù)的變化情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)TF與抗病毒中藥聯(lián)合使用時肉雞的生產(chǎn)性能不如單獨使用TF，由于試驗中未發(fā)生病毒病，因此二者聯(lián)合使用治療疾病方面是否具有協(xié)同作用有待進一步研究，建議臨床合理將TF與其它抗病毒中藥配伍使用，在考慮防治疾病的同時也應(yīng)關(guān)注生產(chǎn)性能的改善。本文綜合雞脾TF理化特性指標、免疫