茶多酚復(fù)合劑對實驗動物抗性效果與機理研究.pdf

1、本研究旨在：①進一步探討茶多酚與茶氨酸的功能，組成以茶多酚、茶氨酸為主體的強效復(fù)合劑，開展抗菌抑菌、增強機體抵抗力、抗瘤抑瘤以及抗(降)血脂的實驗研究；②通過實驗研究，為茶氨酸、茶多酚的生理功能科學(xué)應(yīng)用提供有效的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)；③利用其抗菌抑菌和增強動物機體免疫力的功能，為開發(fā)安全無公害純天然植物飼料添加劑，推進無公害畜產(chǎn)品生產(chǎn)，提供科學(xué)的基礎(chǔ)依據(jù)；④為開發(fā)以茶多酚和茶氨酸為主，具有增強免疫力和抵抗力、抗瘤抑瘤、抗(降)血脂的藥品、功能性食品

2、提供實驗依據(jù)；⑤為尋求天然植物成分復(fù)合劑抗“SARS”、“禽流感”等人畜共患的病毒、細菌性流行病提供實驗依據(jù)。 首先利用7種常見、易得、具有類似功能的植物提取物成分，進行茶多酚、茶氨酸功能增效物的篩選L8(27)的體外抗菌實驗。結(jié)果顯示，魚腥草素、牛至油同茶多酚、茶氨酸配合抗菌抑菌增效效果較好，形成了茶多酚復(fù)合劑。茶多酚復(fù)合劑分別對Colibacillus、Ssalmonella、Staphylococcusaureus抑菌效果

3、及有效濃度L9(34)配合的實驗，得出對Colibacillus、Salmonella和Staphylococcusaureus最低抑菌濃度(MIC)分別為1.25、0.6250.625mg·ml-1，最低殺菌濃度(MBC)為2.5、1.25、1.25mg·ml-1；對Colibacillus、Salmonella、Staphylococcusaureus作用時間與抑菌率(IBR)的關(guān)系發(fā)現(xiàn)均隨時間和濃度的增加提高，并發(fā)現(xiàn)了試物同細菌作

4、用的僵持期(4～8h)；小鼠體內(nèi)抑菌實驗表明，在感染Colibacillus和Staphylococcusaureus之前18h灌喂茶多酚復(fù)合劑，死亡率(72h)分別為40％、30％，感染后1h灌喂死亡率(72h)分別為70％、60％，同對照組比差異極顯著(p＜0.01)和顯著(p＜0.05)。茶多酚復(fù)合劑有很好的體內(nèi)抗菌效果。 采用0、50、100、150mg·kg-1d-1BW-1茶多酚復(fù)合劑灌喂，增強小鼠免疫功能機理的實驗

5、，設(shè)陰性對照組(C0)和低(C1)、中(C2)、高(C3)4個劑量組，每組10～15只小鼠，預(yù)飼7d，實驗期30～45d。末次灌喂24h后分別測定小鼠細胞免疫功能、體液免疫功能、非特異性免疫等指標。結(jié)果表明：茶多酚復(fù)合劑明顯刺激脾淋巴細胞增殖和轉(zhuǎn)化，各組的OD差值均高于C0組，有顯著或極顯著性差異((P＜0.05，P＜0.01)；用二硝基氟苯(DNFB)誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，各劑量組效果均高于C0組，差異達顯著或極顯著水平(P＜0.0

6、5，P＜0.01)，具有顯著促進遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的作用；測定小鼠抗體生成細胞數(shù)，各組均高于C0，C1組(50mg·kg-1·d-1·BW-1)同C0組差異顯著(P＜0.05)，C2組(100mg·kg-1·d-1·BW-1)和C3組(150mg·kg-1·d-4·BW-1)與C0組差異極顯著(P＜0.01)，具有促進分泌IgM抗體生成細胞增殖的作用，在增強機體免疫方面具有極其重要的作用；經(jīng)小鼠血清溶血素的測定，小鼠的抗體積數(shù)均值C1與C0

7、比較差異顯著性(P＜0.05)，C2、C3同C0比較差異極顯著(P＜0.01)，明顯提高小鼠血清溶血素，增加IgG、IgM的數(shù)量；小鼠碳粒廓清實驗各劑量組的吞噬指數(shù)均高于C0組，差異顯著(P＜0.05)，表明該試物具有增進小鼠胸腺、脾臟等免疫器官和促進小鼠單核-巨噬細胞吞噬功能作用；小鼠腹腔單核-巨噬細胞吞噬雞紅細胞(CRBC)實驗，各組小鼠腹腔巨噬細胞對CBRC的吞噬率均高于C0(P＜0.05)，能增強非特異性免疫器官胸腺、脾臟的功能

8、，促進小鼠非特異性免疫功能；小鼠NK細胞活性影響實驗顯示，對小鼠NK細胞活性有顯著性影響(P＜0.05或P＜0.01)，能夠有效地保護免疫細胞的細胞膜，控制LDH外透，提高NK細胞活性；測定小鼠血清溶菌酶含量，能提高溶菌酶的含量，增強機體抵抗力，差異顯著或極顯著(P＜0.05，P＜0.01)。 體外抑(抗)瘤實驗表明，處理48h后，低、中、高劑量組抑瘤率分別達35.92％、42.88％、53.85％，差異顯著(P＜0.05或P＜

9、0.01)，處理72h后，低、中、高劑量組抑瘤率分別達41.29％、46.58％、61.63％，效果顯著；小鼠體內(nèi)抑瘤實驗表明，能顯著降低腫瘤塊的重量(P＜0.01)，體內(nèi)抑瘤率達到26％(P＜0.01)。經(jīng)HE染色切片觀察，試物組腫瘤細胞出現(xiàn)不同程度的形態(tài)改變，細胞核染藍紫色，細胞質(zhì)桃紅色，組織細胞排列緊密，呈現(xiàn)腫瘤細胞凋亡的典型特征；腫瘤細胞DNA凝膠電泳，試物組可見明顯的梯形條帶，出現(xiàn)細胞凋亡的重要生化特征。 抗(抑)S1

10、80肉瘤的機理研究表明，茶多酚復(fù)合劑使S180G1期細胞由51.1％(0μg·ml-1)增加至80.5％(150μg·ml-1)，S期和G2M期細胞比例減少，細胞分裂增殖指數(shù)(PI)減少，細胞分裂增殖逐漸減弱。隨著濃度的增加，誘導(dǎo)S180肉瘤細胞凋亡率(Apo)在50μg·ml-1濃度時達到極顯著的水平(P＜0.01)；茶多酚復(fù)合劑能明顯上調(diào)S180肉瘤細胞PTEN蛋白的表達，分別由35.61±0.48(0μg·ml-1)增加至141.

11、79±3.01(150μg·ml-1)，達到了顯著水平(P＜0.05、P＜0.01)，極顯著減輕H2O2造成的DNA片段程度(P＜0.01)，使瘤細胞阻滯于G1/S限制點，誘導(dǎo)其凋亡；不同濃度茶多酚復(fù)合劑對H2O2(0.4mmol·L-1)誘導(dǎo)的S180肉瘤細胞c-myc、Bcl-2、P53、c-jun、c-fos基因，明顯抑制其表達。 用健康雄性S·D大鼠5組，飼喂42d和70d，進行抗(降)血脂的效果實驗。結(jié)果顯示：高脂模型

12、組(第2組)、高脂試物組(第5組)之間肝指數(shù)(LI)差異極顯著(P＜0.01)，大鼠血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)及游離脂肪酸(FFA)含量，第2組、第3組之間差異顯著(P＜0.05)。經(jīng)肝臟組織學(xué)觀察，正常對照組(第1組)肝臟色澤、質(zhì)地均正常。第2組肝臟外觀彌漫腫大，邊緣變鈍，顏色黃褐，可見表面白色斑點。第5組肝脂肪浸潤狀態(tài)明顯減輕。肝組織切片顯微觀察，第1組均正常，第2組肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝細胞彌漫性脂肪變性，大脂滴將肝細胞核

13、擠向一側(cè)。中央靜脈管壁周圍炎性細胞浸潤，肝竇擴張；第5組脂肪肝狀細胞明顯減少，肝索排列整齊緊密，匯管區(qū)清晰，同肝小葉界限清楚。 抗(降)血脂生化機理實驗表明，血清中LI、TC、TG、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、極低密度脂蛋白(VIDL-C)高脂模型組(第2組)同正常對照組(第1組)比較，差異顯著或極顯著(P＜0.05，P＜0.01)，高脂試物組(第3組)同第1組之間差異不顯著性(P＞0.0

14、5)，第2組和第3組比較差異顯著或極顯著(P＜0.05，P＜0.01)；測定了大鼠血清中反應(yīng)肝臟降解代謝功能和肝損傷的3種酶，第2組和第3組之間谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GlutamicoxaloacetictransaminaseGOT)、堿性磷酸酶(AlkalinephosphataesALP)差異顯著或極顯著(P＜0.05，P＜0.01)，谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(GlutamicpyruvictransaminaseGPT)雖差異不顯著(