LPL基因敲除雜合子小鼠胰島素靶器官內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及胰島素敏感性的研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase,LPL）基因敲除雜合子(LPL+/-)小鼠糖脂代謝及全身胰島素敏感性、測(cè)定胰島素靶器官中脂質(zhì)水平及胰島素刺激后磷酸化 Akt 蛋白的變化，檢測(cè)其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志性分子的表達(dá)，探討了脂毒性在胰島素靶器官以及全身胰島素敏感性中作用，以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在脂毒性引起胰島素抵抗中的作用。
　　 方法：⑴野生型C57 小鼠為對(duì)照組（WT組），LPL+/-小鼠為實(shí)驗(yàn)組（LPL+/-組

2、），每組小鼠再隨機(jī)分為胰島素刺激組及未刺激組。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物普通飲食喂養(yǎng)至28 周齡，測(cè)定其血清、肝臟、骨骼肌中脂質(zhì)水平、稱(chēng)量體重、內(nèi)臟脂肪、皮下脂肪重量。行腹腔注射葡萄糖耐量試驗(yàn)（IPGTT）評(píng)價(jià)全身胰島素敏感性及β細(xì)胞功能。胰島素刺激組小鼠腹腔注射胰島素5mU/g 后處死留取組織，其余小鼠直接處死留取組織。Western-blot 檢測(cè)肝臟、骨骼肌、皮下脂肪、內(nèi)臟脂肪磷酸化 Akt 水平。⑵Real-time PCR 檢測(cè)肝臟、骨骼肌、內(nèi)

3、臟脂肪、皮下脂肪中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志性分子Bip、ATF6、CHOP 的表達(dá)情況，western blot 檢測(cè)肝臟、骨骼肌、內(nèi)臟脂肪、皮下脂肪中Bip 蛋白水平。
　　 結(jié)果：①LPL+/-組小鼠血清、肝臟及骨骼肌中甘油三酯及游離脂肪酸水平均顯著高于WT 組小鼠（P<0.05）。LPL+/-組體重、內(nèi)臟脂肪及皮下脂肪重量、腹脂指數(shù)均明顯高于WT 組（P<0.05）。IPGTT 結(jié)果顯示，LPL+/-組HOMA-IR 及AUCG 較

4、WT 組明顯升高（P<0.05），而ISI 明顯下降（P<0.05）。LPL+/-組肝臟、骨骼肌、內(nèi)臟脂肪胰島素刺激后 Akt 磷酸化升高倍數(shù)較WT組顯著降低（P<0.05），皮下脂肪胰島素刺激后 Akt 磷酸化升高倍數(shù)較WT 組無(wú)差異。②Real-time PCR 結(jié)果顯示，LPL+/-組肝臟Bip、ATF6、CHOP及內(nèi)臟脂肪ATF6、CHOP 表達(dá)較WT 組顯著升高（P<0.05），而骨骼肌及皮下脂肪中Bip、ATF6、CHOP

5、無(wú)顯著變化。Western blot 結(jié)果顯示，LPL+/-組肝臟及內(nèi)臟脂肪中Bip 蛋白水平較WT 組顯著升高（P<0.05），骨骼肌及皮下脂肪中Bip 蛋白水平較WT 組無(wú)顯著差異。
　　 結(jié)論：⑴脂蛋白脂肪酶為脂代謝關(guān)鍵酶之一，與腹型肥胖密切相關(guān)。LPL+/-小鼠脂代謝紊亂，并且糖代謝發(fā)生紊亂，出現(xiàn)了全身胰島素抵抗。脂毒性參與了高脂血癥LPL+/-小鼠胰島素抵抗的發(fā)生。LPL+/-小鼠肝臟、骨骼肌脂質(zhì)的增加、以及內(nèi)臟脂肪重