HPMA-地塞米松復合物(P-dex)對大鼠體內(nèi)骨代謝的影響.pdf

1、[目的]
　　 觀察HPMA-地塞米松復合物(P-dex)長期使用對健康大鼠的骨量，骨質(zhì)量，骨代謝的影響，同時觀察對血液和器官組織的影響，探討P-dex的對骨代謝的作用機制。比較游離的地塞米松(Dexamethasone，Dex)和P-dex在不同給藥劑量(量-效)、不同給藥時間(時-效)對體內(nèi)骨代謝的影響。評價P-dex作為抗關節(jié)炎藥物對骨代謝的影響和長期用藥安全性。
　　 [方法]
　　 實驗一不同劑量的地塞

2、米松對大鼠骨質(zhì)量的影響選用3月齡SPF級雌性SD大鼠31只隨機分為4組：對照組(Control，saline，7只)，地塞米松低劑量組(Dex-L，1mg/kg，8只)，地塞米松中劑量組(Dex-M，2.5mg/kg，8只)，地塞米松高劑量組(Dex-H，5mg/kg，8只)，尾靜脈注射，2次/周。連續(xù)給藥8周。
　　 實驗二 HPMA-地塞米松復合物(P-dex)對大鼠體內(nèi)骨代謝影響選用3月齡SPF級SD健康雌性大鼠102只隨

3、機分出6只作為基礎組，剩下的96只隨機分為兩部分，分別用于8周和12周時間段的實驗。每部分6個組，每組8只。分為正常對照組(Control組)，尾靜脈注射(iv)生理鹽水1.5ml，2次/周；P-dex低劑量組(P-dex-L組)，P-dex16mg/kg，2次/周，(iv)；P-dex高劑量組(P-dex-H組)，P-dex64mg/kg，2周/次，(iv)；地塞米松組(Dex組)，(iv)Dex2mg/kg，2次/周。(注：P-de

4、x16mg/kg相當于Dex2mg/kg的絕對量)。
　　 所有大鼠飼養(yǎng)條件相同，每周記錄1次體重，在實驗結(jié)束前14、13天和4、3天分別給所有大鼠皮下注射鹽酸四環(huán)素(50mg/kg)和鈣黃綠素(10mg/kg)熒光標記兩次。實驗結(jié)束時，心臟取血處死大鼠，分離血清測生化指標；取右側(cè)脛骨及第四腰椎不脫鈣包埋后分別制成骨切片(脛骨上段和腰椎)和骨磨片(脛骨中段)，通過半自動圖像分析系統(tǒng)進行松質(zhì)骨和皮質(zhì)骨的骨組織形態(tài)計量學測量；取左側(cè)

5、股骨和第五腰椎進行骨密度、骨生物力學的測量；取左側(cè)股骨烘干、消化，分成兩份，分別使用ICP離子性發(fā)射光譜儀和羥脯氨酸試劑盒檢測其骨鈣、磷和骨羥脯氨酸的含量。分離肝、腎、腎上腺、脾、子宮、卵巢、胸腺、心和腓腸肌，分別稱取重量。取肝、腎、腎上腺、子宮石蠟包埋，H&E染色病理切片觀察。
　　 [結(jié)果]
　　 1.Dex各用藥組大鼠在實驗結(jié)束點時，與對照組相比，體重均明顯下降(P<0.05)；脛骨上段熒光周長百分率、礦化沉積率、

6、骨形成率明顯降低(P<0.05)，2.5mg/kg與5mg/kg Dex組大鼠骨小梁面積百分數(shù)，骨小梁數(shù)目較對照組明顯增加，骨小梁分離度明顯減少(P<0.05)；然而1mg/kgDex骨密度和2.5mg/kg組羥脯氨酸含量明顯下降，1mg/kgDex與2.5mg/kgDex組生物力學參數(shù)明顯降低。
　　 2.P-dex用藥組大在鼠在8周和12周用藥期間體重均較對照組明顯下降(P<0.01)，血清中甘油三脂和總膽固醇含量明顯上升(

7、P<0.01)，血清中抗酒石酸酸性磷酸酶含量明顯下調(diào)(P<0.05)。P-dex用藥12周血清堿性磷酸含量明顯增加(P<0.05)。P-dex用藥組脛骨上段骨小梁面積百分數(shù)較對照組有下降趨勢(P>0.05)，骨小梁數(shù)目明顯降低(P<0.05)；骨組織計量學動態(tài)數(shù)據(jù)(熒光周長百分率、礦化沉積率、骨形成率)均明顯低于對照組(P<0.05)；P-dex組骨髓中脂肪細胞明顯大量增多。P-dex用藥組股骨中鈣磷鎂含量明顯下降(P<0.05)，但其

8、股骨骨密度無明顯改變。P-dex股骨生物力學參數(shù)明顯降低(P<0.05)。P-dex不明顯影響大鼠脛骨中段骨計量學靜態(tài)參數(shù)，但明顯降低中段骨組織計量學動態(tài)數(shù)據(jù)(P<0.05)。P-dex用藥組大鼠腦、心、肝、腎濕重指數(shù)較明顯增加(P<0.05)；脾、胸腺、腎上腺、腓腸肌濕重指數(shù)明顯下降(P<0.05)。病理切片表明，P-dex用藥組大鼠肝細胞變性、腎小球和腎上腺明顯萎縮。
　　 3.P-dex用藥組與Dex用藥組大鼠相比，體重明

9、顯降低，血清中甘油三脂和總膽固醇明顯增加(P<0.05)，8周P-dex組大鼠血清血糖明顯低于Dex組(P<0.05)。12周P-dex大鼠血糖逐漸升高。12周P-dex大鼠血磷、堿性磷酸酶明顯較Dex組高(P<0.05)，抗酒石酸酸性磷酸酶明顯低于Dex組(P<0.05)；P-dex組大鼠脛骨上段松質(zhì)骨靜態(tài)參數(shù)與Dex無顯著性差異，而松質(zhì)骨動態(tài)數(shù)據(jù)(熒光周長百分率、礦化沉積率、骨形成率)均明顯低于Dex組(P<0.05)，骨髓中脂肪細

10、胞明顯較Dex組多，股骨中鈣磷鎂含量、骨密度以及骨生物力學參數(shù)與Dex組無顯著性差異。8周實驗P-dex-L組骨髓面積較Dex組明顯增大，皮質(zhì)骨面積明顯減少(P<0.05)。8周和12周實驗，P-dex組大鼠脛骨中段骨熒光周長明顯短于Dex組。P-dex用藥組在腦、心、腎、腎上腺、腓腸肌等軟組織濕重指數(shù)均較Dex有顯著性差異(P<0.05)。
　　 4.P-dex高劑量少次給藥(P-dex-H)與低劑量多次給藥(P-dex-L)

11、相比，P-dex-H對血清指標，骨組織形態(tài)計量學參數(shù)以及骨生物力學等方面產(chǎn)生的負面效應大于P-dex-L。P-dex用藥12周對骨代謝、骨質(zhì)量、軟組織、血清指標等的影響比8周實驗更明顯。
　　 5.Celecoxib與MTX用藥12周與P-dex相比，明顯降低大鼠股骨骨密度(P<0.05)，但不抑制骨形成，兩用藥組骨生物力學參數(shù)(彈性載荷，最大載荷，斷裂載荷)均高于P-dex用藥組(P<0.05)，與對照組處在同一水平。

12、　　 [結(jié)論]
　　 1 Dex明顯抑制骨形成，降低骨轉(zhuǎn)換，隨著劑量增加，骨小梁面積百分數(shù)增加，骨密度和骨生物力學性能下降，同時骨內(nèi)有基質(zhì)合成降低，非礦化骨形成增加，骨質(zhì)量降低。以1mg/kg的Dex對骨的質(zhì)量影響最明顯，該劑量略增加骨小梁面積百分數(shù)，但骨形成、骨生物力學性能、骨內(nèi)有基質(zhì)含量明顯下降。不同劑量的Dex對骨質(zhì)量的影響不同，劑量與骨質(zhì)量之間無比例依賴關系。
　　 2長期大劑量使用P-dex明顯下調(diào)健康大鼠的

13、體重，升高血清血脂，減少皮下脂肪，引起脂質(zhì)代謝混亂，誘導肝細胞變性同時誘導腎上腺、胸腺和腎小球萎縮，強烈抑制骨形成，同時也抑制骨吸收，因而骨量變化不大，引起骨髓中的脂肪細胞大量增多，負面影響骨質(zhì)量，有造成骨質(zhì)疏松的可能。
　　 P-dex的效能遠高于與P-dex中裝載的Dex藥量等同的游離Dex的效能，應用時應低劑量運用。P-dex大劑量長期實驗引起的負面影響，隨用藥時間的延長而增大，大劑量單次給藥產(chǎn)生的負面影響大于小劑量多次給