苯丙氨酸二肽類化合物Y101抗乙肝病毒機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究苯丙氨酸二肽類化合物 Y101（Phenylalanine dipetide compounds Y101,PDCY101）體外抗乙肝病毒作用和對(duì)免疫功能的影響，并探討其作用機(jī)制。方法：1.體外實(shí)驗(yàn)（1）Y101對(duì)2.2.15細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)：用24孔板接種2.2.15細(xì)胞48小時(shí)后，加5種不同濃度Y101藥液（100、75、50、25、12.5μg/ml）,每4天換一次藥液，維持8天，用顯微鏡觀察細(xì)胞病變，計(jì)算其半數(shù)細(xì)胞毒濃度

2、（TC50）和最大無毒濃度（TC0）；（2）在Y101無毒濃度以下（50μg/ml），設(shè)50、25、12.5μg/ml3個(gè)濃度組、拉米夫定陽性對(duì)照組（50μg/ml）和2.2.15細(xì)胞對(duì)照組，分別收集給藥4天、8天及停藥4天的細(xì)胞和培養(yǎng)液，酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定培養(yǎng)液中HBeAg和HBsAg的含量；（3）普通PCR定性檢測(cè)Y101對(duì)2.2.15細(xì)胞中HBV-DNA和cccDNA表達(dá)量的影響，實(shí)時(shí)熒光定量PCR準(zhǔn)確檢測(cè)各組2.2.1

3、5細(xì)胞中所提取的HBV-DNA和cccDNA含量；（4）3H同位素標(biāo)記法研究體外Y101對(duì)鴨乙型肝炎DNA多聚酶（DHBV RCs DNAP）的抑制效果。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)（1）采用碳廓清試驗(yàn)和血清溶血素試驗(yàn)，觀察Y101對(duì)正常Balb/C小鼠的非特異性免疫的影響以及對(duì)正常昆明小鼠體液免疫的影響。
　　結(jié)果：1.體外實(shí)驗(yàn)（1）Y101對(duì)2.2.15細(xì)胞半數(shù)細(xì)胞毒濃度（TC50）為79.44μg/ml，最大無毒濃度（TC0）為50μg/m

4、l。（2）與1％DMSO細(xì)胞對(duì)照組相比，Y101（50μg/ml）對(duì)HBsAg具有一定的抑制作用，在給藥4天、8天和停藥4天的平均抑制率分別為31.80%、47.09%、40.08%；對(duì)HBeAg抑制率相對(duì)較低，給藥4天、8天和停藥4天的平均抑制率分別為5.76%、20.98%、3.61%；（3）Y101（50μg/ml、25μg/ml）對(duì)2.2.15細(xì)胞內(nèi)HBV DNA和cccDNA的表達(dá)具有不同程度的抑制作用，在細(xì)胞培養(yǎng)的8天高劑量

5、組（50μg/ml）的抑制作用達(dá)到最大，HBV DNA和cccDNA的平均抑制率分別為83.4%和75.8%，且在停藥后4天仍保持較高的抑制率。（4）Y101對(duì)鴨乙型肝炎DNA多聚酶（DHBV RCs DNAP）無抑制作用，陽性對(duì)照藥磷甲酸鈉（PFA）對(duì)DHBV RCs DNAP的IC50為1.27μM。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)（1）巨噬細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)，與正常組相比，Y101（100mg/kg）具有提高正常小鼠吞噬指數(shù)（α）的作用（P<0.05）

6、；（2）血清溶血素實(shí)驗(yàn)，與模型組相比，Y101（100mg/kg、50mg/kg）能夠顯著提高小鼠血清溶血素水平（P<0.01），并可以增加脾臟、胸腺等免疫器官的重量（P<0.01）。
　　結(jié)論：（1）Y101明顯抑制2.2.15細(xì)胞HBsAg和HBeAg的分泌和細(xì)胞內(nèi)HBV DNA和cccDNA的表達(dá)，表明其具有一定的抗乙肝病毒的活性。（2）Y101抗乙肝病毒的作用不是通過抑制DNA聚合酶，而可能是通過直接抑制細(xì)胞內(nèi)cccDNA