苯丙氨酸二肽類化合物Y101保肝作用研究及機制探討——“新藥創(chuàng)制”科技重大專項.pdf

1、肝臟是人體內(nèi)最大的實質(zhì)器官，其結(jié)構(gòu)和功能復雜，易受多種病原體、毒物及免疫病理累及。目前，乙肝病毒性肝炎已成為我國人民乃至世界人民的大敵，具有發(fā)病率高，而且感染率更高的特點。但是乙型肝炎的控制與治療長期以來都沒有很好的藥物。
　　 苯丙氨酸二肽類化合物Y101是從苗族藥馬蹄金中分離、設計所得的二肽衍生物，現(xiàn)已證實其具有明顯的抗乙肝病毒作用。在此基礎上，為了全面了解其抗乙肝作用，本課題著重探討其保肝降酶、利膽退黃、增強免疫功能作用及

2、作用機制。
　　 目的:利用D-半乳糖胺鹽酸鹽(D-Galan)、四氯化碳(CCl4)、α-萘異硫氰酸酯(ANIT)、膽總管結(jié)扎、刀豆蛋白(ConA)所致不同類型肝損傷，探討Y101保肝降酶、利膽退黃、增強免疫功能作用及作用機制。
　　 方法:試驗分正常組、模型組、Y101低、中、高劑量組（根據(jù)預實驗設定小鼠給藥劑量:Y101低劑量組(25mg·kg-1)、中劑量組(50mg·kg-1)、高劑量組（100mg·kg-1）

3、;大鼠給藥劑量:Y101低劑量組(17.5 mg·kg-1)，中劑量組(35mg· kg-1)，高劑量組(70 mg·kg-1)陽性對照組（根據(jù)不同模型特點分別選用聯(lián)苯雙酯、茵梔黃顆粒、鱉甲軟肝片作為陽性對照藥）。給藥方式均為灌胃給藥。造模方法:1.Y101保肝降酶實驗:腹腔注射D-Galan造成小鼠急性肝損傷模型[1-3]，測定小鼠血清中ALT、AST水平，肝組織勻漿中SOD、MDA含量并對肝組織做病理切片，觀察Y101對急性肝損傷的

4、影響;皮下注射CCL4造成大鼠慢性肝損傷模型[4、5],測定大鼠血清中ALT、AST、ALP、TP、ALB水平，肝、脾、胸腺系數(shù)以及肝組織勻漿中Hyp、SOD、GSH、MDA和NO含量，做肝組織病理切片，觀察Y101對慢性肝損傷的影響。2.利膽退黃實驗:腹腔注射ANIT造成小鼠膽汁淤積性黃疸模型[6、7]，測定小鼠血清中TB、ALT、AST水平，以及肝組織勻漿中SOD、GSH、MDA、和NO含量并對肝組織做病理切片，觀察Y101的退黃功

5、效;大鼠膽總管插管[8]，觀察Y101對正常大鼠膽汁流量及其成分的影響。3.增強免疫功能實驗:尾靜脈注射ConA造成小鼠免疫性肝損傷模型[9、10]，測定小鼠血清中ALT、AST水平，肝、脾、胸腺系數(shù)以及肝組織勻漿中SOD、GSH、MDA、和NO含量，做肝組織病理切片觀察Y101對免疫功能的影響。所有數(shù)據(jù)均以(x)±s表示，組間比較采用重復測量的單因素方差分析進行。
　　 結(jié)果:1.Y101各劑量可降低D-Galn致小鼠血清轉(zhuǎn)氨

6、酶(ALT、AST)水平(P＜0.05)，（其降酶率分別為35％、40％、46％;23％、29％、36％），明顯改善急性肝損傷小鼠肝臟病理變化。
　　 2.Y101明顯降低CCl4所致慢性肝損傷大鼠的血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)水平(P＜0.05)，（其降酶率分別為0％、42％、50％;0％、31％、43％，）堿性磷酸酶(ALP)活性(P＜0.05)，（其降酶率為3％、13％、24％）;和升高白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)含量

7、，（升高率分別為10％、10％、12％:7％、11％、9％），降低肝、脾指數(shù)，（下降率分別為8％、10％、12％;15％、23％、21％），升高胸腺指數(shù)，(上升率為11％、14％、17％)，升高肝組織中SOD、GSH、Hyp含量(上升率分別為6％、19％、18％;24％、46％、53％;17％、19％、19％)，降低MDA、NO含量，(下降率分別為21％、31％、36％;24％、23％、28％)，并能明顯改善慢性肝損傷大鼠肝臟病理變化。

8、
　　 3.Y101可降低ANIT所致膽汁淤積性黃疸肝損傷小鼠血清膽紅素(TB)含量(P＜0.05)（下降率為34％、41％、56％），降低血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)水平(P＜0.05)（降酶率分別為43％、54％、63％;27％、27％、38％），升高肝組織中SOD、GSH含量，（上升率分別為4％、15％、26％;6％、11％、15％），降低MDA、NO含量，（下降率分別為4％、18％、21％;12％、17％、17％），并能

9、明顯改善膽汁淤積性黃疸小鼠肝臟病理變化。
　　 4.Y101單次給藥在每個時間段均能明顯增加大鼠膽汁流量，在給藥30min后作用明顯，在60min時達到高峰(43％)，持續(xù)到90分鐘仍保持較高排出量并能明顯增加膽汁中膽紅素(TB)、膽固醇(TC)、膽汁酸(TBA)的排出量，且以高劑量最為明顯。
　　 5.Y101能夠降低ConA所致肝損傷小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)水平(P＜0.05)，（降酶率分別為:42％、54％

10、、56％;20％、43％、45％），降低肝、脾指數(shù)，下降率分別為(20％、23％、22％;44％、52％、55％)升高胸腺指數(shù)（升高率:27％、30％、40％）升高肝組織中SOD、GSH含量（上升率分別為1％、15％、25％;23％、23％、38％），降低MDA、NO含量(下降率分別為:10％、24％、33％;20％、22％、25％)，并能減輕免疫性肝損傷小鼠肝臟病理變化。
　　 綜上所述，Y101具有明顯的保肝降酶、利膽退黃、