酒客樂對慢性胰腺炎大鼠PDGF—BB和FN表達的影響.pdf

1、目的建立大鼠慢性胰腺炎模型，運用實驗檢測指標，研究中藥復(fù)方酒客樂對慢性胰腺炎大鼠血小板源性生長因子-BB(PDGF-BB)和纖維連接蛋白(FN)表達的影響，以及飲酒與慢性胰腺炎后并發(fā)糖尿病之間的相關(guān)性，并探討中藥防治慢性胰腺炎可能的作用機制。 方法清潔級雄性Wistar大鼠隨機分為6組(A組：實驗組、B組：模型組、C組：達吉對照組、D組：空白組，為考察飲酒與CP后并發(fā)糖尿病之間的相關(guān)性，另設(shè)兩組以DDC腹腔注射加白酒灌胃，其中一

2、組給予酒客樂干預(yù)，設(shè)為E組，另一組不給予藥物干預(yù)，設(shè)為F組)置于空調(diào)房間(22℃)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，E、F組每日除正常喂養(yǎng)外，給予白酒灌胃一次(劑量8g/kg)。實驗前禁食(不禁水)12小時，A、B、C、E、F組均每周兩次(周一、周四)腹腔內(nèi)注射二乙基二硫代氨基甲酸鹽(DDC)，劑量為750mg/kg，D組每周兩次注射等劑量的生理鹽水，共4周。各組自第6周開始給予灌胃給藥：B組、D組與F組按10ml/kg體重給予生理鹽水灌胃，A組、E組按

3、10ml/kg(2g/kg)體重給予酒客樂中藥水煎劑灌胃，C組按10ml/kg(50mg/kg)體重給予達吉灌胃，連續(xù)4周。造模及給藥期間各組均予常規(guī)飼料，E、F組每日除正常喂養(yǎng)外，給予白酒灌胃一次(劑量8g/kg)。實驗結(jié)束前一天記錄大鼠體重，禁食24小時后，測大鼠尾靜脈血糖，再摘除眼球取血，然后脫頸椎處死，打開腹腔取新鮮胰腺組織，用4％多聚甲醛固定后，送往武警醫(yī)院病理科常規(guī)處理切片后，一部分HE染色，用于病理形態(tài)學(xué)觀察，另一部分送往

4、武漢市宜康科技有限公司進行免疫組化染色PDGF-BB、FN，光鏡下觀察照相。 結(jié)果1一般狀況D組(空白組)大鼠一般狀況良好，8周后體重明顯增加，飲食、活動正常，二便量及性狀無明顯改變，皮毛光澤。B組(模型組)大鼠造模2周后可觀察到部分大鼠開始出現(xiàn)食量減少，扭體。至造模4周后普遍出現(xiàn)食量減少、扭體外，體重亦有所減輕。至第9周時絕大部分大鼠除仍有食量明顯減少、扭體、體重下降、精神倦怠、反應(yīng)遲鈍、皮毛疏松無光澤外，還出現(xiàn)了大便稀溏，少

5、數(shù)甚至出現(xiàn)了步態(tài)不穩(wěn)、衰竭貌。C組(對照組)大鼠早期出現(xiàn)進食量減少，扭體，體重減輕，后期進食量無明顯減少，扭體次數(shù)明顯減少，部分大鼠有稀糊狀大便。A組(實驗組)早期亦出現(xiàn)進食量減少，扭體，體重減輕，但后期進食量增加，活動正常，皮毛光澤，大便性狀無明顯改變，體重未見明顯減輕，絕大部分大鼠未再出現(xiàn)扭體。E組和F組(即DDC腹腔注射加白酒灌胃的兩組，其中E組給予酒客樂干預(yù)，F(xiàn)組不給予藥物干預(yù))早期除出現(xiàn)進食量減少，扭體外，還出現(xiàn)大便性狀改變和

6、多飲、多尿、體重減輕。后期E組進食量增加，絕大部分大鼠未再出現(xiàn)扭體，亦未見明顯多飲、多尿，活動正常，皮毛尚光澤，體重未進一步減輕。F組后期進食量明顯減少，扭體，大便呈稀糊狀，多飲，多尿，體重明顯減輕，絕大部分大鼠精神倦怠、反應(yīng)遲鈍、皮毛疏松無光澤、步態(tài)不穩(wěn)、嗜睡、呈衰竭貌。 酒客樂能明顯改善慢性胰腺炎大鼠一般狀況，治療前各組大鼠體重無顯著差異(P＞0.05)，治療結(jié)束后，D組大鼠體重明顯增加(P＜0.01)，B、F組大鼠體重顯著

7、減輕(P＜0.01)，C、F組與B組相比無明顯差異(P＞0.05)，A、E兩組大鼠體重分別高于B、F組(P＜0.01)，E組和F組之間有明顯差異(P＜0.05)。 2血糖、血淀粉酶 治療結(jié)束后，各組大鼠血淀粉酶均低于D組，其中A、E兩組大鼠血淀粉酶與D組相比有顯著性差異(P＜0.05)，B、F兩組大鼠血淀粉酶與D組相比有非常顯著性差異(P＜0.01)。A、E兩組大鼠血淀粉酶高于B組，有顯著性差異(P＜0.05)。E、F組

8、大鼠血糖高于D組，有非常顯著性意義(P＜0.01)，E組血糖要低于F組，有顯著性差異(P＜0.05)，F(xiàn)組血糖顯著高于B組(P＜0.01)，A、B、C組大鼠血糖與D組相比無明顯差異(P＞0.05)。 3胰腺組織病理形態(tài)學(xué) 光鏡下觀察可見模型組胰腺組織胰管顯著增生，胰管周圍及小葉間纖維組織輕度增生，伴炎癥細胞浸潤，小葉內(nèi)腺泡組織局限性纖維化或無改變。空白組胰管未見擴張，胰腺間質(zhì)未見纖維組織增生，亦未觀察到炎癥細胞浸潤。

9、 4胰腺組織血小板源性生長因子-BB表達的測定 PDGF-BB免疫組化標記后，光鏡下可見模型組PDGF-BB主要表達于胰腺腺泡細胞及導(dǎo)管上皮細胞的胞質(zhì)中，呈棕黃或棕褐色。而空白組大鼠不表達或僅微弱地表達于腺泡細胞內(nèi)，呈淡黃色。半定量分析其表達程度，A、E兩組PDGF-BB的表達程度顯著低于B組(P＜0.05)，D組PDGF-BB的表達程度非常顯著低于B組(P＜0.01)，F(xiàn)組PDGF-BB的表達程度顯著高于B組(P＜0.05

10、)，C組PDGF-BB的表達程度與B組相比無明顯差異(P＞0.05)。 5胰腺組織纖維連接蛋白表達的測定 FN免疫組化標記后，光鏡下可見模型組FN主要表達在小葉間及腺泡周圍纖維組織中，呈樹枝狀分布呈網(wǎng)格狀包繞腺泡，在小血管周圍和導(dǎo)管周圍也有少量表達，呈棕黃或棕褐色，并隨間質(zhì)病變程度的增加而增加。空白組大鼠較弱地表達于間質(zhì)中，呈淡黃色。半定量分析其表達程度，A、E兩組FN的表達程度顯著低于B組(P＜0.05)，D組FN的表

11、達程度非常顯著低于B組(P＜0.01)，F(xiàn)組PDGF-BB的表達程度顯著高于B組(P＜0.05)，C組PDGF-BB的表達程度與B組相比無明顯差異(P＞0.05)。 結(jié)論二乙基二硫代氨基甲酸鹽每周兩次，連續(xù)四周腹腔注射，能在較短時間內(nèi)成功誘導(dǎo)出慢性胰腺炎模型。中藥復(fù)方酒客樂能明顯抑制慢性胰腺炎大鼠胰腺組織中血小板源性生長因子-BB及纖維連接蛋白的表達，改善慢性胰腺炎大鼠的一般狀況及胰腺內(nèi)外分泌功能，對慢性胰腺炎胰腺纖維化起到較好