IL-6基因啟動(dòng)子區(qū)-572G-C、-597G-A多態(tài)性的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)及其與漢族人冠心病的關(guān)系.pdf_第1頁(yè)
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1、目的: 為了研究IL-6基因多態(tài)性與心血管病的相關(guān)性,根據(jù)熒光共振能量轉(zhuǎn)移和溶點(diǎn)曲線分析原理,建立了一種IL-6基因快速分型的實(shí)時(shí)熒光分析方法。并通過(guò)對(duì)中國(guó)北方地區(qū)漢族人IL-6基因啟動(dòng)子區(qū)-572G/C,-597G/A多態(tài)性與體重指數(shù)(BMI)和炎癥因子等生化指標(biāo)的相關(guān)性的調(diào)查,探索基因多態(tài)性與冠心病(CHD)發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。 方法: 利用實(shí)時(shí)熒光PCR方法檢測(cè)我國(guó)北方地區(qū)漢族人群IL-6基因啟動(dòng)子-572G/

2、C,-597G/A的多態(tài)性。甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)采用酶法測(cè)定。高密度脂蛋白膽固醇(HDL)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)采用均相酶法測(cè)定。脂蛋白a[Lp(a)]、載脂蛋白A1(ApoA1)、載脂蛋白A2(ApoA2)、載脂蛋白B(ApoB)、載脂蛋白C2(ApoC2)、載脂蛋白C3(ApoC3)、載脂蛋白E(ApoE)采用免疫透射比濁法測(cè)定。超敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)采用顆粒增強(qiáng)的免疫散射比濁法測(cè)定。白細(xì)胞介素-6(IL

3、-6)采用細(xì)胞因子芯片檢測(cè)。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光PCR方法、直接DNA測(cè)序、聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)三種檢測(cè)方法的比較,分析其對(duì)77例樣本檢測(cè)結(jié)果的一致性。 結(jié)果: 一、在國(guó)內(nèi)首次成功建立了同時(shí)檢測(cè)IL-6基因啟動(dòng)子區(qū)一572G/C、-597G/A多態(tài)性的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法。用DNA測(cè)序方法驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果正確。經(jīng)對(duì)中國(guó)北方地區(qū)漢族123例健康對(duì)照和194例冠心病患者的IL-6基因檢測(cè),發(fā)現(xiàn)在-597位點(diǎn)僅

4、有兩種基因型,為GG型和GA型,尚未發(fā)現(xiàn)AA型。-572位點(diǎn)有三種基因型,分別為GG,GC,CC型。其中-597GA型為國(guó)內(nèi)首次報(bào)道。 二、實(shí)時(shí)熒光PCR方法、直接DNA測(cè)序、RFLP三種檢測(cè)方法的比較分析發(fā)現(xiàn):在77例樣本中,采用實(shí)時(shí)熒光PCR方法與直接DNA測(cè)序相比僅有3例結(jié)果不一致。77例PCR產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶。BsrBI酶切,有20例與實(shí)時(shí)熒光PCR方法結(jié)果不一致。當(dāng)PCR產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶FokI酶切時(shí),僅有5例是G

5、A型,另外兩例未被檢測(cè)出。 三、統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)IL-6基因啟動(dòng)子區(qū)-572G/C基因型頻率和等位基因頻率在冠心病組和對(duì)照組中的分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。攜帶G等位基因(GG+GC)和非G等位基因(CC)頻率在冠心病組和對(duì)照組中的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在正常對(duì)照組中,與非G等位基因相比,攜帶G等位基因組的收縮壓中位數(shù)水平顯著升高。在所有觀測(cè)對(duì)象中,與非G等位基因相比,攜帶G等位基因組的BMI、hsCRP、收縮壓中位數(shù)水平顯著升高。

6、四、Logistic回歸分析顯示,ApoC2、TH、lip(a)、年齡、TG、性別、高血壓是本研究對(duì)象冠心病發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,ApoAl是保護(hù)因子,未見(jiàn)G等位基因是一個(gè)獨(dú)立的危險(xiǎn)因子。 結(jié)論: 實(shí)時(shí)熒光PCR方法在30分鐘內(nèi)能夠完成32例樣本兩個(gè)位點(diǎn)的同時(shí)檢測(cè)。與DNA測(cè)序、RFLP方法相比,具有簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、快速的特點(diǎn),便于臨床實(shí)驗(yàn)室大規(guī)模樣本篩查。本研究未發(fā)現(xiàn)IL-6基因啟動(dòng)子區(qū)-597G/A多態(tài)性與CHD的易感性有

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