胎膜早破和先兆流產(chǎn)陰道微生態(tài)及免疫功能改變的研究.pdf

1、WHO提出醫(yī)學面臨亞健康與難治病兩大主題。而亞健康的干預和現(xiàn)代難治病的防治都與人體微生態(tài)的調(diào)節(jié)密切相關(guān)。微生態(tài)系是宿主常駐微生物群與宿主生態(tài)區(qū)在長期進化過程中形成的，雙方保持著正常的物質(zhì)、能量及信息的交流，即微生態(tài)學中的“三流運轉(zhuǎn)學說”。因此，宿主的健康、免疫、營養(yǎng)、消化、抗腫瘤作用及生物拮抗、抗衰老等都離不開自身攜帶的正常微生物群。免疫是正常微生物群的一個重要生理功能。粘膜免疫系統(tǒng)是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，陰道正常菌群對宿主的體液

2、免疫和細胞免疫的形成有一定的影響，陰道正常微生物群與宿主的免疫功能配合，有利于抵御外界細菌的入侵。Th1細胞亞群分泌IL-2、TNF、IFN-γ等，介導細胞免疫應答，Th1細胞可參與遲發(fā)性超敏反應和器官特異性自身免疫性疾病。Th2細胞亞群可分泌IL-4、IL-6、lL-10等細胞因子，輔助B細胞介導的體液免疫應答，并在過敏性疾病和感染性疾病中發(fā)揮作用，同時抑制Th1細胞的增殖。 近年來，人們一直在積極尋找導致胎膜早破和早產(chǎn)發(fā)生的

3、可能原因。胎膜早破與宮頸松弛癥、重體力勞動、過度使用腹壓這些機械性因素和營養(yǎng)不良有關(guān)。病理證實早破胎膜的特征為胎膜中細胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)表達的低水平?，F(xiàn)在研究說明MMPs/TIMPs失衡為胎膜早破的一個重要機制。研究提示胎膜早破與細胞凋亡有關(guān)。人們早已發(fā)現(xiàn)感染是胎膜早破的一個非常重要的因素，它與胎膜早破互為因果。已報道與胎膜早破有關(guān)的病原體有B族溶血性鏈球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、生殖支原體、弓形蟲、淋球菌及某些厭氧菌。先兆流產(chǎn)的確切病因

4、目前尚不清楚，引起流產(chǎn)的病因較多，如染色體異常、內(nèi)分泌異常、免疫因素、感染因素和解剖因素等。隨著現(xiàn)代分子細胞學技術(shù)、生殖免疫學和生殖遺傳學等學科的交叉發(fā)展，在分子和細胞水平上對流產(chǎn)的發(fā)病機理有了新的認識。近年，國內(nèi)外對Th1、Th2型細胞因子的研究證明，Th1、Th2細胞因子平衡對妊娠結(jié)局關(guān)系密切。宮內(nèi)感染是早產(chǎn)流產(chǎn)的重要因素之一，特別是逆行性宮內(nèi)隱性感染。厭氧性類桿菌屬可以產(chǎn)生大量磷脂酶A2，誘導子宮局部組織細胞膜磷脂分解，使花生四烯

5、酸增加，從而使前列腺素合成增加，導致妊娠早期發(fā)生流產(chǎn)． 研究目的: 綜合目前國內(nèi)外研究，不明原因流產(chǎn)病因及發(fā)病機制仍在不斷探索當中，從母體血清研究TH1/TH2免疫失衡的文獻較多，從感染與流產(chǎn)相關(guān)的角度研究亦有不少報道。但從陰道微生態(tài)失衡，陰道黏膜免疫的精細調(diào)控研究流產(chǎn)的病因及發(fā)病機制卻不多。本研究旨在通過分離培養(yǎng)陰道菌群的各種細菌和免疫因子測定，了解正常婦女，妊娠婦女，先兆流產(chǎn)婦女的陰道微生態(tài)的演替，黏膜免疫系統(tǒng)的調(diào)控

6、能力，從而找出先兆流產(chǎn)的可能原因。另一方面，尋找導致胎膜早破因素的研究早已廣泛開展，但目前仍未能找到一個有效的預防措施，減少胎膜早破的發(fā)生，減少早產(chǎn)，減低圍產(chǎn)兒發(fā)病率和死亡率。本文研究胎膜早破發(fā)生后陰道微環(huán)境的演變及黏膜免疫狀況的改變，并探討在陰道微環(huán)境改變后機會致病菌感染的可能性。旨在找出胎膜早破發(fā)生的有關(guān)因素。 實驗材料與方法: 1．實驗對象 收集2006年10月～2007年4月在廣州市番禺區(qū)人民醫(yī)院就診的正

7、常婦女46例，正常孕婦23例，胎膜早破31例，先兆流產(chǎn)的婦女16例。 2．實驗方法 2.1 臨床資料收集記錄這些婦女的姓名、年齡、住院號等，并記錄孕產(chǎn)史、簡要病史、體格檢查情況。 2.2陰道分泌物的采集使用無菌棉棒，將無菌棉棒圍繞陰道上中1/3～2/3段反復刮取，置于無菌試管，取6管。 2.3細菌培養(yǎng)方法 2.3.1取5管陰道分泌物馬上送細菌室，在培養(yǎng)皿(血平板、沙氏平板、巧克力平板、厭氧菌平板、

8、真菌顯色培養(yǎng)基、支原體培養(yǎng)基)上接種培養(yǎng)，培養(yǎng)出的菌群全部行細菌鑒定。 2.3.2進行衣原體抗原檢測。 2.4細胞因子測定 2.4.1取1管陰道分泌物放入磷酸鹽緩沖液1ml，(用注射器精確測量)，搖勻離心后取上清液，置-20℃冰箱保存待測。 2.4.2 IL-2濃度測定：(放射免疫法) 2.4.2.1 取出待測標本溶解。 2.4.2.2 IL-2標準品的制備：每瓶用1.0ml緩沖液溶解后分

9、別為1，3，9，27，81ng/L。 2.4.2.3 將待測陰道分泌物上清液及IL-2標準品各100ul與IL-2抗血清100ul混勻，置4℃冰箱溫育24小時。 2.4.2.4 加入免疫分離劑500ul混勻，在室溫放置15分鐘。 2.4.2.5 3500轉(zhuǎn)離心15分鐘，測定總放射性。 2.4.2.6 吸棄上清夜，測各管沉淀的放射性。 2.4.2.7 計算各管的百分結(jié)合率。 2.4.2.8

10、計算各標準品的結(jié)合率B/B<,0>％，作出標準曲線。被檢標本根據(jù)B/B<,0>％結(jié)合率從標準曲線上查得其IL-2濃度。 2.4.2.9 使用logit-log數(shù)據(jù)處理模式，由電腦自動處理得出結(jié)果。 2.4.3 IL-6濃度測定：(放射免疫法) 2.4.3.2 IL-6標準品的制備。 2.4.3.3 將待測陰道分泌物上清液及IL-6標準品各100ul與IL-6抗血清100ul混勻，置4℃冰箱溫育18小時。余

11、同IL-2。 2.4.4 TNF-α濃度測定：(放射免疫法)2.4.4.2 TNF-α標準品的制備。 2.4.4.3 將待測陰道分泌物上清液及TNF-α標準品各100ul與TNF-α抗血清100ul混勻，置4℃冰箱溫育18小時。余同IL-2。 結(jié)論: 1．破膜時間越長，陰道微環(huán)境檢出的菌種越多，IL-6,TNF-α亦升高，提示陰道微環(huán)境發(fā)生不利改變，陰道的炎癥反應增加。在一定程度上推測菌群失調(diào)和免疫微環(huán)境改變可能