Wnt信號(hào)通路與動(dòng)脈損傷后再狹窄的關(guān)系研究.pdf

1、冠狀動(dòng)脈支架術(shù)后再狹窄一直是限制其遠(yuǎn)期療效的最大難題，藥物涂層支架技術(shù)可以將再狹窄率降至10％左右，但還未在根本意義上消除再狹窄的發(fā)生。了解血管損傷后再狹窄的基因調(diào)控機(jī)制可能是最終解決這個(gè)難題的關(guān)鍵之一。
　　 大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為血管球囊損傷后再狹窄是由于中膜平滑肌增生、遷移并分泌大量細(xì)胞外基質(zhì)形成增厚的新生內(nèi)膜所造成的。在這個(gè)過(guò)程中，血管壁細(xì)胞及血液成分通過(guò)自分泌，旁分泌等形式共同參與了平滑肌細(xì)胞的增生遷移和轉(zhuǎn)型。實(shí)驗(yàn)研究提示，利

2、用抑制平滑肌細(xì)胞增殖的某些藥物確實(shí)可以減輕血管成形術(shù)后再狹窄的程度。
　　 關(guān)于Wnt信號(hào)通路在血管再狹窄中的調(diào)控作用是一新的研究領(lǐng)域，雖然有研究提示W(wǎng)nt信號(hào)通路可能參與了血管受損傷后平滑肌細(xì)胞的增殖，但其證據(jù)還不充分，且缺乏在體研究的資料。
　　 在血管損傷內(nèi)膜修復(fù)的過(guò)程中，炎癥反應(yīng)是一個(gè)必經(jīng)的環(huán)節(jié)，而某些中藥成分，如大黃素等具有抗炎的作用，這些中藥成分是否具有預(yù)防血管損傷后狹窄的作用及作用的機(jī)制還不清楚。
　

3、　 本研究的目的：(1)為解決血管再狹窄這一難題提供新的治療靶點(diǎn)，(2)并為中藥在這一領(lǐng)域的深入研究和開(kāi)發(fā)提供新的思路和資料。
　　 第一部分Wnt信號(hào)通路在AngⅡ誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖及膠原分泌中的作用
　　 實(shí)驗(yàn)分為7組：空白對(duì)照組，AngⅡ(10-6mol/L)組，AngⅡ+阿托伐他汀0.1umol/L組，AngⅡ+阿托伐他汀1umol/L組，AngⅡ+阿托伐他汀10umol/L組，AngⅡ+SiRN

4、A-dvl-1組，AngⅡ+SiRNA-dvl-1+阿托伐他汀10umol/L組；MTT實(shí)驗(yàn)增加阿托伐他汀0.1、1、10umol/L組。
　　 結(jié)果顯示：(1)SiRNA-dvl-1引起轉(zhuǎn)錄后基因沉默后，AngⅡ誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞增殖被顯著抑制；1umol/L濃度阿托伐他汀對(duì)正常培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞無(wú)增殖抑制作用，但可明顯抑制AngⅡ誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞增殖(P<0.05)，阿托伐他呈時(shí)間和濃度依賴性地抑制AngⅡ誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞的

5、增殖；(2)AngⅡ可誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞Wnt4、Dvl-1、β-catenin的mRNA和蛋白的高表達(dá)，用SiRNA沉默dvl-1基因則可顯著逆轉(zhuǎn)AngⅡ誘導(dǎo)的Dvl-1、β-catenin的高表達(dá)，阿托伐他汀(1、10umol/L)呈濃度依賴地抑制AngⅡ誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞Wnt4、Dvl-1、β-catenin的高表達(dá)；(3)SiRNA-dvl-1及阿托伐他汀(1、10umol/L)可顯著抑制AngⅡ誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞Col-

6、1、Col-3的mRNA和蛋白的高表達(dá)。
　　 以上結(jié)果表明：1)AngⅡ誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞增殖時(shí)，胞內(nèi)Wnt通路信號(hào)分子呈高表達(dá)；2)當(dāng)SiRNA-dvl-1及阿托伐他汀抑制AngⅡ誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖時(shí)，胞內(nèi)wnt通路信號(hào)分子的表達(dá)均顯著降低；3)AngⅡ誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞膠原基因的高表達(dá)與胞Wnt通路的激活有關(guān)。
　　 結(jié)論：Wnt信號(hào)通路參與了AngⅡ誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞增殖。
　　 第二部分Wnt信

7、號(hào)通路在球囊損傷后大鼠頸動(dòng)脈的表達(dá)
　　 建立大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型，分為假手術(shù)組，模型組，他汀干預(yù)組。
　　 結(jié)果顯示：(1)大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后6周，損傷段血管內(nèi)膜增厚明顯，與假手術(shù)組比較，內(nèi)膜/中膜厚度比顯著增加(P<0.05)，內(nèi)膜膠原含量顯著增加(P<0.05)；與模型組比較，他汀組的內(nèi)膜/中膜厚度比下降(P<0.05)，內(nèi)膜膠原含量減少(P<0.05)；(2)免疫組化染色示模型組損傷段血管內(nèi)膜中膜Wnt4、d

8、vl-1、β-catenin表達(dá)增加，而他汀組上述信號(hào)分子表達(dá)減少；(3)動(dòng)脈損傷組織的Wnt4、dvl-1、β-catenin，CyclinD1蛋白表達(dá)水平顯著增高，而他汀干預(yù)組的表達(dá)明顯減少；(4)模型組Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白的表達(dá)水平明顯高于他汀組。
　　 上述結(jié)果表明：1)在體頸動(dòng)脈損傷后的病理改變與Wnt信號(hào)分子的表達(dá)水平相關(guān)；2)阿托伐他汀可減輕在體頸動(dòng)脈損傷后的病理改變，并伴有Wnt信號(hào)分子表達(dá)的降低；3)在體頸動(dòng)脈損

9、傷后Ⅰ型及Ⅲ膠原的合成、分泌也與Wnt通路信號(hào)分子的表達(dá)有關(guān)。
　　 結(jié)論：Wnt信號(hào)通路參與了在體頸動(dòng)脈球囊損傷后的病理改變
　　 第三部分大黃素預(yù)防動(dòng)脈損傷后再狹窄作用及機(jī)制探討體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
　　 實(shí)驗(yàn)分組：正常對(duì)照組，AngⅡ組，大黃素組，AngⅡ+大黃素組，AngⅡ+SiRNA組，AngⅡ+SiRNA+大黃素組。
　　 結(jié)果顯示：(1)大黃素可濃度依賴性地抑制AngⅡ刺激所致的血管平滑肌細(xì)胞的增殖

10、；(2)抑制平滑肌細(xì)胞增殖的濃度的大黃素可明顯下調(diào)AngⅡ誘導(dǎo)的Wnt4、Dvl-1、β-catenin、Cyclin-D1的mRNA及蛋白的高表達(dá)；(3)大黃素可明顯下調(diào)AngⅡ誘導(dǎo)的Ⅰ型和Ⅲ型膠原mRNA和蛋白的高表達(dá)。
　　 在體實(shí)驗(yàn),建立大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型，分為假手術(shù)組，模型組，大黃素(灌胃)干預(yù)組。
　　 結(jié)果顯示：(1)與模型組比較，大黃素組內(nèi)膜增生減輕，內(nèi)皮層相對(duì)平整；新生內(nèi)膜面積、內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜/中膜

11、面積比均減少(P<0.05)；(2)免疫組化染色示血管損傷處的Wnt4、Dvl-1、β-catenin以及Col-1、Col-3的表達(dá)較模型組下降(P<0.05)；(3)動(dòng)脈損傷處的wnt4、Dvl-1、β-catenin、CyclinD1及Col-1、Col-3的蛋白表達(dá)低于模型組；(4)苦味酸天狼星紅膠原特異染色顯示大黃素組膠原容積積分(collagenvolumefraction，CVF)減少。
　　 上述結(jié)果表明：1)大