皮膚惡性黑色素瘤中RUNX3基因甲基化的研究.pdf

1、目的:研究皮膚惡性黑色素瘤中RUNX3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化與其基因表達(dá)的關(guān)系，探討RUNX3基因甲基化在皮膚惡性黑色素瘤發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法:采用半定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)人惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375中的RUNX3基因mRNA轉(zhuǎn)錄水平、甲基化特異性多聚酶鏈反應(yīng)(MSP)檢測(cè)其啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)、Western Blot檢測(cè)其蛋白表達(dá)情況；比較經(jīng)不同濃度去甲基化藥物5-雜氮胞苷(5-azac)(0μmol

2、/l，1μmol/l，5μmol/l，10μmol/l，20μmol/l)處理A375細(xì)胞后，RUNX3基因mRNA的表達(dá)水平、啟動(dòng)子區(qū)CpG島的甲基化狀態(tài)及蛋白表達(dá)情況的差異，并用MTT法觀察5-雜氮胞苷對(duì)細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果:在人惡性黑色素瘤細(xì)胞株A375中，去甲基化藥物5-雜氮胞苷處理前，RUNX3基因表達(dá)缺失，處于失活狀態(tài)，且該基因啟動(dòng)子區(qū)呈高甲基化狀態(tài)。但經(jīng)不同濃度5-雜氮胞苷處理細(xì)胞后，失活的RUNX3基因得以重新