通過(guò)CD123分子靶向白血病干細(xì)胞治療急性髓性白血病的病毒-基因治療策略及研究.pdf

1、中山大學(xué)博士學(xué)位論文通過(guò)CD123分子靶向白血病干細(xì)胞治療急性髓性白血病的病毒基因治療策略及研究姓名：譚麗申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：黃文林20090526【l山人學(xué)博I：學(xué)位論文譚暇白血病的治療，不僅可以清除LSC而且還不會(huì)對(duì)造血于細(xì)胞(HematopoieticStemCell，HSC)造成損傷，是AML治療的有效方案。白血病的基因靶向治療是一種值得探索的方案。有效的基因治療依賴于外源基因高效、穩(wěn)定的表達(dá)，病毒載體介導(dǎo)的

2、基因轉(zhuǎn)移以其高轉(zhuǎn)染效率和良好的靶向性而成為基因治療中應(yīng)用最廣泛的技術(shù)手段?；蛑委熒婕鞍谢?、靶基因載體和靶基因的表達(dá)調(diào)控。在本課題的研究中我tfJ汞]用CDl23分子作為靶，運(yùn)用分子生物學(xué)的技術(shù)和手段對(duì)病毒載體進(jìn)行修飾或加工使其能夠充分地靶向白血病母細(xì)胞群及白血病干細(xì)胞，以期達(dá)到治療白血病的目的。本研究分三部分：l、靶基因的選擇首先我們通過(guò)體外的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)確定了對(duì)細(xì)胞有明顯毒性作用的靶基因即長(zhǎng)臂猿白血病病毒的融合基因包膜糖蛋白(Gibb

3、onApeleukemiavirus，GALV—FMG)，研究結(jié)果顯示GALV—FMG在AML細(xì)胞株HL60細(xì)胞中的表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)牛融合，形成多核合胞體，融合指數(shù)在轉(zhuǎn)染后的96h達(dá)至1153257％，和空載體轉(zhuǎn)染組及空白組相比有顯著的差別(P005)。多核合胞體的形成可引起伴隨ATP消耗的線粒體失能，導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生壞死性死亡，PI染色發(fā)現(xiàn)死亡的多核合胞體在第5天達(dá)到總合胞體的約70％，而乳酸脫氫酶的活性在同樣的時(shí)間里也達(dá)到了約80％。說(shuō)

4、明多核合胞體的不斷形成導(dǎo)致了細(xì)胞死亡的不斷發(fā)牛。我們通過(guò)AO／EB染色也發(fā)現(xiàn)GALVFMG轉(zhuǎn)染組的HL60細(xì)胞表現(xiàn)為大量的壞死。GALVFMG的表達(dá)引起細(xì)胞發(fā)生死亡的機(jī)制與HSP70的表達(dá)增加有關(guān)，我們的研究發(fā)現(xiàn)GALV—FMG的表達(dá)不僅可以誘導(dǎo)HSPT0的表達(dá)增高，而且還可以通過(guò)阻斷IrBa的降解來(lái)抑制NF出活性和核轉(zhuǎn)位，而NFk：B的抑制被發(fā)現(xiàn)又可以負(fù)調(diào)控HSP70的表達(dá)。因此GALVFMG可通過(guò)抑制NFrd3對(duì)HSP70的表達(dá)產(chǎn)生