奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌分離鑒定及丹參抑菌活性成分研究.pdf

1、奶牛子宮內(nèi)膜炎是臨床上奶牛的常見多發(fā)疾病，主要由病原微生物感染引起，應(yīng)用抗生素及化學(xué)合成類藥物治療有效，但日益嚴(yán)峻的病原耐藥性、藥物殘留及環(huán)境災(zāi)害已引起社會(huì)各界的高度關(guān)注。中藥多數(shù)來(lái)自天然，化學(xué)成分多樣，臨床療效歷經(jīng)驗(yàn)證，業(yè)已成為新藥研發(fā)的重要資源。丹參是唇形科植物丹參（Salvia miltiorrhiza Bge）的干燥根和根莖，具有活血祛瘀，通經(jīng)止痛，涼血消癰的功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，丹參具有顯著的抗氧化，抗菌抗炎和改善微循環(huán)等作

2、用。本試驗(yàn)進(jìn)行了奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌的分離鑒定、丹參抑菌活性部位的篩選、丹參抑菌活性部位成分的分離鑒定及其單體化合物的抑菌作用研究，取得以下結(jié)果:
　　(1)奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌的分離鑒定采用平板培養(yǎng)法從忠有子宮內(nèi)膜炎奶牛子宮分泌物中分離純化病原菌，從形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)方面進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明，從患病奶牛子宮分泌物中分離純化得到臨床分離菌4種，經(jīng)形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定為金黃色葡萄球菌、鏈球菌、枯草芽胞桿菌和大腸埃希氏菌O111∶

3、 K58(B4)。
　　(2)丹參抑菌活性部位的篩選采用試管預(yù)試法對(duì)丹參化學(xué)成分進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水等溶劑制備丹參部位提取物，通過(guò)瓊脂擴(kuò)散法及微量肉湯法檢測(cè)抑菌作用。結(jié)果表明，丹參中含有黃酮及其苷類、酚類、生物堿、氨基酸類、甾體、萜類和內(nèi)酯類化合物;丹參石油醚及乙酸乙酯部位提取物對(duì)金黃色葡萄球菌、鏈球菌、沙門氏菌和枯草芽胞桿菌有不同程度的抑菌作用，正丁醇及水部位提取物抑菌作用不明顯。說(shuō)明石油醚和乙酸乙酯部位提

4、取物是丹參的主要抑菌活性部位。
　　(3)丹參抑菌活性部位成分的分離鑒定丹參石油醚和乙酸乙酯部位提取物，依次用不同比例的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫進(jìn)行分離，并進(jìn)行二次硅膠柱色譜和重結(jié)晶純化，共得到6種單體化合物，經(jīng)理化性質(zhì)、13C-NMR和1H-NMR譜圖測(cè)定分析進(jìn)行鑒定結(jié)構(gòu)為:丹參酮ⅡA、隱丹參酮、β-谷甾醇-D-葡萄糖苷、丹參酮Ⅰ、二氫丹參酮Ⅰ和β-谷甾醇。其中石油醚部位提取物中隱丹參酮、丹參酮ⅡA，乙酸乙酯部位提取物中丹參酮Ⅰ

5、和二氫丹參酮Ⅰ的含量較高。
　　(4)丹參單體化合物的抑菌作用采用瓊脂擴(kuò)散法和微量肉湯稀釋法，對(duì)隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA和二氫丹參酮Ⅰ等成分進(jìn)行體外抑菌試驗(yàn)。結(jié)果表明:隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA、二氫丹參酮Ⅰ對(duì)奶牛子宮內(nèi)膜炎金黃色葡萄球菌、枯草桿菌臨床分離株具有極強(qiáng)抑菌作用;對(duì)無(wú)乳鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC12386、大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)株ATCC25922、大腸埃希氏菌臨床分離株O111∶ K58(B4)及鏈球菌臨床分離株等有不