低水平鉛暴露對發(fā)育期大鼠視網(wǎng)膜、視神經(jīng)的影響.pdf

1、全文分為三部分： 第一部：分發(fā)育期低水平鉛暴露動物模型的建立 目的:建立發(fā)育期SD(Sprague-Dawley,SD)大鼠低水平鉛暴露的動物模型.觀察出生后不同發(fā)育時期正常及低水平鉛暴露大鼠血鉛、視網(wǎng)膜鉛水平,為進(jìn)一步研究鉛暴露對嬰幼兒視覺系統(tǒng)的損害提供依據(jù). 方法:健康清潔級SD雌鼠懷孕后隨機(jī)分為兩組,從受孕3-5天開始分別飲用去離子水和0.2﹪醋酸鉛溶液,且各自持續(xù)整個妊娠期和哺乳期.所產(chǎn)子代分為2組用于實

2、驗: (1)、正常對照組:飲用去離子水母鼠的子代繼續(xù)飲用去離子水; (2)、鉛暴露組:鉛暴露母鼠的子代斷乳后停止飲用0.2﹪醋酸鉛溶液,改飲用去離子水.在仔鼠不同發(fā)育時期P3、P6、P9、P12、P15、P20、P25、P30、P40、P50天取仔鼠視網(wǎng)膜和P6的血樣.采用無火焰石墨爐原子吸收光譜法測定視網(wǎng)膜鉛和血鉛含量. 結(jié)論： 1、鉛暴露仔鼠視網(wǎng)膜鉛水平隨著發(fā)育逐漸升高,鉛暴露組視網(wǎng)膜鉛水平均

3、高于正常對照組,約在P20天達(dá)到峰值.鉛在機(jī)體內(nèi)無任何生理作用,視網(wǎng)膜鉛水平升高是視網(wǎng)膜以及視覺神經(jīng)系統(tǒng)損害的基礎(chǔ). 2、發(fā)育期鉛暴露仔鼠視網(wǎng)膜鉛與血鉛代謝規(guī)律的相關(guān)性更接近.但視網(wǎng)膜鉛的半衰期可能更長,代謝更慢. 第二部分:低水平鉛暴露對發(fā)育期大鼠視網(wǎng)膜、視神經(jīng)形態(tài)學(xué)影響 目的:通過不同發(fā)育階段SD大鼠眼球石蠟切片HE(Haematoxylin Eosin,HE)染色,視神經(jīng)HE及羅克沙爾固蘭(Luxol F

4、ast Blue)染色,光鏡觀察正常及鉛暴露仔鼠視網(wǎng)膜各層發(fā)育變化規(guī)律,視神經(jīng)面積及髓鞘發(fā)育變化模式.超薄切片電鏡觀察鉛暴露仔鼠視網(wǎng)膜、視神經(jīng)超微結(jié)構(gòu)的變化.探討鉛對發(fā)育期大鼠視網(wǎng)膜、視神經(jīng)的形念學(xué)的影響. 方法:正常及鉛暴露仔鼠于出生的P3、P6、P9、P12、P15、P20、P25、P30、P40、P50天取眼球和視神經(jīng).分別固定、脫水、石蠟包埋、切片.視網(wǎng)膜行HE染色;視神經(jīng)分別行HE和Luxol Fast Blue染色.

5、光鏡觀察.取P6、P15、P50正常及鉛暴露仔鼠眼后極部視網(wǎng)膜、視神經(jīng),固定、超薄切片、染色,電鏡觀察. 結(jié)論： 1、隨著發(fā)育正常SD大鼠視網(wǎng)膜厚度變薄,三個核層細(xì)胞均存在生理性調(diào)亡.視神經(jīng)逐漸增粗,在出生后的第3天至第15天增加幅度是最大的.大鼠視神經(jīng)髓鞘約在出生后30天基本形成. 2、低水平鉛暴露使發(fā)育期視網(wǎng)膜、視神經(jīng)發(fā)育異常延遲.改變視網(wǎng)膜、視神經(jīng)的發(fā)育模式. 3、低水平鉛暴露使發(fā)育期視網(wǎng)膜細(xì)胞病理

6、性凋亡,以外核層細(xì)胞為顯著. 4、低水平鉛暴露使發(fā)育期視神經(jīng)脫髓鞘、形成延遲.對軸突、微絲及微管結(jié)構(gòu)影響不大. 第三部分:低水平鉛暴露對發(fā)育期大鼠視網(wǎng)膜NMDA受體亞單位基因表達(dá)的影響 目的:應(yīng)用半定量RT-PCR的方法研究正常及鉛暴露組仔鼠不同發(fā)育時期視網(wǎng)膜NMDA受體亞單位的mRNA表達(dá)變化模式,了解鉛暴露對視覺神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及可塑性的影響,探索鉛對發(fā)育期視覺系統(tǒng)損害的機(jī)制. 方法:正常及鉛暴露仔鼠于出

7、生的P3、P6、P9、P12、P15、P20、P25、P30、P40、P50天時取視網(wǎng)膜.分別提取總RNA及合成cDNA,用NMDA-NR1,NMDA-2A,NMDA-2B為引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增.產(chǎn)物電泳,Quantity One拍照,并分析. 結(jié)論： 1、就視網(wǎng)膜NMDA受體而言,正常大鼠視網(wǎng)膜發(fā)育成熟過程也是由NMDA.2B逐漸向NMDA-2A轉(zhuǎn)換的過程. 2、鉛暴露使發(fā)育期SD仔鼠視網(wǎng)膜NMDA受體亞單位的轉(zhuǎn)