組織蛋白酶B和趨化因子受體4在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:甲狀腺癌是內(nèi)分泌腫瘤中最常見(jiàn)的惡性腫瘤,占內(nèi)分泌惡性腫瘤的91.5％,約占全身惡性腫瘤的1%,近年來(lái)其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。按腫瘤的病理分型,甲狀腺癌可分為乳頭狀癌、濾泡狀癌、未分化癌、髓樣癌。其中甲狀腺乳頭狀癌最常見(jiàn),此類型甲狀腺癌局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高,少數(shù)可發(fā)生血行轉(zhuǎn)移.因此充分利用現(xiàn)代免疫學(xué)和分子生物學(xué)理論和技術(shù)探索甲狀腺乳頭狀癌侵襲轉(zhuǎn)移的規(guī)律十分必要,并可為臨床診治提供可靠依據(jù)。組織蛋白酶B(cathepsin B,CB)是一種

2、蛋白水解酶,對(duì)多種植物蛋白(大豆、玉米、棉籽蛋白等)和動(dòng)物蛋白(血紅蛋白、血清蛋白、卵黃磷蛋白、明膠等)都有水解活性。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CB可以降解纖連蛋白、Ⅰ型膠原蛋白、Ⅳ型膠原蛋白和層粘連蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分,還可以激活尿激酶型纖溶蛋白酶原激活劑、基質(zhì)金屬蛋白酶等。腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移又必須降解細(xì)胞外基質(zhì),因此認(rèn)為CB在腫瘤侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的過(guò)程中起重要作用。趨化因子受體4(CXC chemokine receptor4,CXCR4)屬于G蛋白

3、偶聯(lián)受體超家族成員,是一類以基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(SDF-1)為結(jié)合配體的趨化因子受體。近年來(lái)研究指出,趨化因子SDF-1與其特異性受體CXCR4所構(gòu)成的CXCR4/SDF-1生物學(xué)軸(CXCR4/SDF-1 biological axis)在多種腫瘤的播散和器官特異性轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的作用。因此提出了腫瘤細(xì)胞依靠趨化因子實(shí)現(xiàn)器官特異性轉(zhuǎn)移的理論模型:腫瘤細(xì)胞高表達(dá)特異的趨化因子受體,而有些腫瘤轉(zhuǎn)移的靶器官高表達(dá)其相應(yīng)的趨化因子配體,腫瘤

4、細(xì)胞藉趨化因子與其受體的特異性結(jié)合力,完成向這些器官的特異性轉(zhuǎn)移。目前組織蛋白酶B在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)及與甲狀腺乳頭狀癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系及組織蛋白酶B與趨化因子受體4在甲狀腺乳頭狀癌侵襲轉(zhuǎn)移中的相互關(guān)系國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)報(bào)道。本課題采用免疫組織化學(xué)SP法和RT-PCR的方法檢測(cè)組織蛋白酶B、趨化因子受體4在甲狀腺乳頭狀癌、腺瘤旁正常甲狀腺組織中表達(dá)情況,探討CB和CXCR4在甲狀腺乳頭狀癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及兩者在在甲狀腺乳頭狀癌侵襲轉(zhuǎn)移中的相

5、互關(guān)系,為臨床治療甲狀腺乳頭狀癌提供理論依據(jù)。
　　方法:1.40例甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinomas,PTC)取自2005年1月至2007年12月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院甲狀腺外科手術(shù)切除標(biāo)本,并經(jīng)由有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)生病理確診。所選病例術(shù)前未經(jīng)任何治療。標(biāo)本均在手術(shù)切除后一部分放入液氮保存用于提取RNA,一部分甲醛固定、脫水、透明、包埋,用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)。另取10例腺瘤旁正常甲狀腺組織為對(duì)照

6、。2.采用免疫組織化學(xué)SP法和RT-PCR的方法檢測(cè)組織蛋白酶B、趨化因子受體4在甲狀腺乳頭狀癌、腺瘤旁正常甲狀腺組織中表達(dá)情況。3.采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩樣本率的比較采用四格表資料的x~2檢驗(yàn),兩等級(jí)變量的相關(guān)分析采用spearman秩相關(guān)分析。以P<0.05為差異顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果:1.組織蛋白酶B蛋白陽(yáng)性信號(hào)定位于胞漿中,為棕黃色顆粒。在正常甲狀腺組織中不表達(dá),在甲狀腺乳頭狀癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為65

7、%(26/40)。甲狀腺乳頭狀癌中組織蛋白酶B蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常甲狀腺組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);組織蛋白酶B mRNA在正常甲狀腺組織中表達(dá)率為0,在甲狀腺乳頭狀癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為82.5%(33/40)。甲狀腺乳頭狀癌中組織蛋白酶B mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常甲狀腺組織(P<0.05)。組織蛋白酶B蛋白和mRNA在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)與患者的性別、年齡和腫瘤直徑之間的關(guān)系經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異(P>0.0

8、5),與浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系經(jīng)檢驗(yàn)存在顯著性差異(P<0.05)。浸潤(rùn)被膜、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組織蛋白酶B蛋白和mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于未浸潤(rùn)被膜、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。2.趨化因子受體4蛋白陽(yáng)性信號(hào)定位于胞漿中,為棕黃色顆粒。在正常甲狀腺組織中不表達(dá),在甲狀腺乳頭狀癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為60%(24/40)。甲狀腺乳頭狀癌中趨化因子受體4蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常甲狀腺組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);趨化因子受體4mRNA

9、在正常甲狀腺組織中表達(dá)率為0,在甲狀腺乳頭狀癌中的陽(yáng)性表達(dá)率為80%(32/40)。甲狀腺乳頭狀癌中趨化因子受體4mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常甲狀腺組織(P<0.05)。組趨化因子受體4蛋白和mRNA在甲狀腺乳頭狀癌中的表達(dá)與患者的性別、年齡和腫瘤直徑之間的關(guān)系經(jīng)檢驗(yàn)無(wú)顯著性差異(P>0.05),與浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系經(jīng)檢驗(yàn)存在顯著性差異(P<0.05)。浸潤(rùn)被膜、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者趨化因子受體4蛋白和mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率明

10、顯高于未浸潤(rùn)被膜、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。3.在本組40例甲狀腺乳頭狀癌中,組織蛋白酶B蛋白和趨化因子受體4蛋白經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)兩者呈明顯正相關(guān)(P<0.05)。4.應(yīng)用spearman相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),CB、CXCR4 mRNA表達(dá)與蛋白表達(dá)之間呈顯著相關(guān)。在相同組別CB、CXCR4 mRNA表達(dá)率高于蛋白表達(dá)率,并且隨著CB、CXCR4 mRNA表達(dá)增加,其蛋白表達(dá)也相應(yīng)增加。
　　結(jié)論:1.組織蛋白酶B在正常甲狀腺組織中不表達(dá),在甲狀腺乳頭狀

11、癌組織中高表達(dá),其表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌的浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān);提示組織蛋白酶B與甲狀腺乳頭狀癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。2.趨化因子受體4在正常甲狀腺組織中不表達(dá),在甲狀腺乳頭狀癌組織中高表達(dá),其表達(dá)與甲狀腺乳頭狀癌的浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān):提示趨化因子受體4與甲狀腺乳頭狀癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。3.組織蛋白酶B和趨化因子受體4蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中表達(dá)的相關(guān)性提示,組織蛋白酶B和趨化因子受體4蛋白的異常表達(dá)在甲狀腺乳頭狀癌侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中可能具有