神經(jīng)鞘磷脂合成酶基因沉默對SMMC-7721細胞凋亡的影響(血清SM、CETP和PLTP對2型糖尿病形成的作用).pdf

1、近年報道稱ⅡTDM(Ⅱ Type Diabetes mellitus，Ⅱ TDM)與動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)關(guān)系密切，炎癥可能是二者之間共同的病理基礎(chǔ)。已知神經(jīng)鞘磷脂(sphingomyelin，SM)是AS的獨立危險因子，推測神經(jīng)鞘磷脂對ⅡTDM有一定的影響。又知神經(jīng)酰胺(Ceramide，Cer)是調(diào)節(jié)細胞凋亡、增殖的重要信號分子，SM和Cer均是鞘脂代謝的重要化合物，神經(jīng)鞘磷脂合成酶(sphingomy

2、elin synthase，SMS)是催化底物卵磷脂(Phosphatidylcholine，PC)和Cer生成產(chǎn)物SM和甘油二酯(Diglyceride，DAG)的關(guān)鍵酶，且動脈粥樣硬化和ⅡTDM患者均存在脂代謝紊亂。因此，本課題以SMMC-7721細胞為實驗?zāi)Ｐ?，研究神?jīng)鞘磷脂合成酶基因沉默后與細胞凋亡的關(guān)系，并檢測ⅡTDM患者血清中SM、磷脂轉(zhuǎn)移蛋白(phospholipid transfer protein，PLTP)及膽固醇酯

3、轉(zhuǎn)移蛋白(cholesterol ester transfer protein，CETP)水平，探討與ⅡTDM的關(guān)系。
　　 目的：
　　 觀察神經(jīng)鞘磷脂合成酶基因沉默后其酶活性水平及細胞凋亡作用，探討血清SM、CETP和PIXP水平與ⅡTDM之間的關(guān)系，為ⅡTDM發(fā)生機制和臨床治療提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 以人肝癌(SMMC-7721)細胞作為實驗?zāi)Ｐ?，用MTT法篩選腫瘤壞死因子(TNF-α)

4、誘導(dǎo)SMMC-7721細胞凋亡的劑量、采用RNA干擾技術(shù)使神經(jīng)鞘磷脂合成酶基因沉默、用薄層層法檢測神經(jīng)鞘磷脂合成酶基因沉默后酶活性水平、Annexin V-FITC/PI雙染法和Hoechst33258/PI檢測細胞凋亡情況、Western blot檢測Caspase-8及Caspase-3蛋白表達的變化。根據(jù)2009年美國糖尿病協(xié)會確診ⅡTDM，酶法檢測ⅡTDM患者血清SM水平與血糖值和熒光分析法測定CETP及PLTP水平。
　

5、　 結(jié)果：
　　 MTT顯示不同濃度的TNF-α作用對SMMC-7721細胞均有凋亡作用，凋亡率與其濃度呈正相關(guān)(劑量依賴關(guān)系)，經(jīng)篩選后本實驗以TNF-α的濃度為200ng·μL-1誘導(dǎo)凋亡、基因沉默后神經(jīng)鞘磷脂合成酶活性水平降低、細胞凋亡率升高，與對照組相比有顯著差異、Caspase-8及Caspase-3蛋白量表達增加。ⅡTDM患者血清SM、PLTP和CETP水平高于對照組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：