CA誘導(dǎo)早熟凝集染色體作為生物劑量計的研究.pdf

1、目的：
　　 1、探索用calyculinA誘導(dǎo)外周血淋巴細(xì)胞發(fā)生早熟染色體凝集的最優(yōu)化方案。
　　 2、探討CalyculinA誘導(dǎo)早熟染色體凝集技術(shù)作為低劑量電離輻射生物劑量計的可行性。
　　 3、為了解決低傳能線密度輻射誘發(fā)的染色體畸變存在劑量率效應(yīng)的問題，分別觀察不同劑量率條件下的劑量效應(yīng)關(guān)系，并建立相應(yīng)的劑量效應(yīng)曲線和數(shù)學(xué)模型，以便較為準(zhǔn)確地估算不同劑量率受照人員的生物劑量。
　　 4、通過運用

2、CalyculinA誘導(dǎo)PCC技術(shù)，探索QPCC法估算6MV X射線局部受照份額與劑量的可行性。
　　 方法：
　　 1、抽取健康成年獻(xiàn)血員外周血6ml，分別接種于12瓶預(yù)先配置好的RPMI-1640培養(yǎng)基（20％的小牛血清、1％的PHA，1％的HEPES）中，然后隨機分成3組并編號。培養(yǎng)48h后收獲制片，培養(yǎng)至24h時加入秋水仙素，繼續(xù)培養(yǎng)至46h時加入CalyculinA。采用析因?qū)嶒炘O(shè)計對影響早熟凝集染色體形態(tài)和數(shù)

3、量的兩個主要因素秋水仙素和CalyculinA分別進(jìn)行兩個水平上的探討，并應(yīng)用相關(guān)統(tǒng)計學(xué)方法對分裂指數(shù)(MI)進(jìn)行分析，以此判斷最優(yōu)方案。
　　 2、抽取健康成年人的抗凝外周靜脈血，用X射線分別照射0、0.1Gy、0.25 Gy、0.5 Gy、0.75 Gy和1 Gy。劑量率為400 MU/min。照射后將血樣接種于RPMI1640培養(yǎng)基中于37℃、5％CO2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48 h，當(dāng)培養(yǎng)24 h時加入秋水仙素，終止培養(yǎng)前2h

4、加入CalyculinA誘導(dǎo)早熟凝集染色體，收獲制片并用Giemsa染液染色，觀察G1、G2/M-PCC細(xì)胞中總畸變率、斷片率、雙著絲粒體加著絲粒環(huán)率與輻射劑量的效應(yīng)關(guān)系。采用盲法閱片，每個劑量點分析1000個G1、G2/M-PCC細(xì)胞，計數(shù)各劑量組染色體畸變數(shù)，應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計分析。采用WHO提供的3種數(shù)學(xué)模式對實驗數(shù)據(jù)做曲線擬合，通過檢驗回歸系數(shù)的顯著性和曲線的擬合度確定擬合曲線。
　　 3、抽取健康成

5、年人的抗凝外周靜脈血6 ml，肝素抗凝后分裝于12個0.5 ml的EP管中密封，分成2組，每組6個，將EP管放入固體水的插孔中，劑量率分別采用100 Mu/min和200 Mu/min。用X射線分別照射0、0.1 Gy、0.25 Gy、0.5 Gy、0.75 Gy和l Gy。然后接種于RPMI1640培養(yǎng)基中，放置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h，當(dāng)培養(yǎng)24h時加入秋水仙素，終止培養(yǎng)前2h加入CalyculinA誘導(dǎo)早熟凝集染色體，收獲制片并

6、用Giemsa染液染色，采用盲法閱片，計數(shù)各標(biāo)本的染色體雙著絲粒+環(huán)畸變率。應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件包分析染色體畸變率與照射劑量之間的關(guān)系，分別擬合不同劑量率的劑量效應(yīng)曲線和數(shù)學(xué)模型。
　　 4、抽取健康成年人的抗凝外周靜脈血，用X射線分別照射0、5 Gy、10 Gy、15 Gy、20 Gy和25 Gy。培養(yǎng)52h并用CalyculinA誘導(dǎo)PCC。記錄各劑量點PCC指數(shù)、PCC環(huán)以及斷片數(shù)，判斷觀察到的PCC環(huán)是否符合泊松

7、分布，分別建立相應(yīng)的PCC環(huán)率和斷片率的劑量效應(yīng)關(guān)系曲線。同時用8 Gy6MV X射線照射離體健康人外周血，受照份額為20％、50％、80％模擬局部照射。
　　 結(jié)果：
　　 1、不同水平的秋水仙素和CalyculinA培養(yǎng)的標(biāo)本:淋巴細(xì)胞活化佳，CalyculinA終濃度高的的實驗組獲得的分裂指數(shù)明顯高于CalyculinA終濃度低的實驗組，CalyculinA終濃度的不同水平影響的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，

8、秋水仙素終濃度的不同水平影響的差異同樣具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 2、用CalyculinA可成功誘導(dǎo)人外周血淋巴細(xì)胞產(chǎn)生PCC，且總畸變率、斷片率、雙著絲粒體加著絲粒環(huán)率隨照射劑量的增加而增加，呈現(xiàn)出明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。根據(jù)不同劑量X射線照射后誘發(fā)的PCC畸變率統(tǒng)計結(jié)果，用SPSS16.0統(tǒng)計軟件擬合其劑量效應(yīng)的回歸方程，計算方程擬合度(R2)，檢驗回歸系數(shù)的顯著性。結(jié)果表明，在0～1.0Gy劑量范圍內(nèi)，斷片率、雙

9、著絲粒體+著絲粒環(huán)率、總畸變率擬合的最佳數(shù)學(xué)模式，均為二次多項式:y=a+bD+cD2
　　 3、在劑量率一定的情況下，各劑量點的(dic+r)率隨吸收劑量增加而增加。同一劑量點不同劑量率射線誘發(fā)的(dic+r)畸變率隨劑量率的增加而增加，劑量率效應(yīng)明顯。
　　 4、統(tǒng)計結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCC指數(shù)隨著劑量水平的增高而降低，各劑量點樣品中PCC環(huán)分布符合泊松分布。PCC環(huán)率與斷片率都隨著受照劑量增加而增加。每個受損細(xì)胞所含多余PC

10、C斷片數(shù)與照射劑量之間符合線性模式，其數(shù)值可被用于模擬局部照射的劑量估算。
　　 結(jié)論：
　　 1、淋巴細(xì)胞培養(yǎng)24h之后加秋水仙素使其終濃度達(dá)0.04μg/ml，繼續(xù)培養(yǎng)至48h收獲，與收獲前2h加calyculinA使其終末濃度達(dá)60 nM，可以獲得較高比例的分裂指數(shù)，容易計數(shù)，可對原始損傷作出較準(zhǔn)確的估計。
　　 2、早熟染色體凝集技術(shù)可以用于估算低劑量受照者輻射劑量。
　　 3、在估算低傳能線密度