DNA指紋技術(shù)對近交系小鼠生產(chǎn)擴大群的遺傳檢測.pdf

1、近交系小鼠具有遺傳的穩(wěn)定性和表型的一致性，越來越多地應(yīng)用于科學(xué)研究中。但由于在近交系小鼠的繁育過程中容易發(fā)生遺傳污染或突變，應(yīng)用這樣的動物進行試驗，不僅會造成經(jīng)濟浪費，而且可能得出錯誤的結(jié)論，因此加強對近交系小鼠遺傳質(zhì)量的檢測非常必要。長期以來，應(yīng)用于近交系小鼠遺傳質(zhì)量檢測的方法主要有：皮膚移植法、毛色基因檢測及生化位點檢測技術(shù)等。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，DNA指紋技術(shù)已初步被應(yīng)用于近交系小鼠的遺傳質(zhì)量檢測。本文通過DNA指紋技術(shù)在近

2、交系小鼠生產(chǎn)擴大群遺傳檢測中的應(yīng)用研究，并與生化位點標(biāo)記分析法進行比較，旨在篩選出具有精確、可靠、特異性好的實驗動物遺傳檢測方法，為建立分子生物學(xué)實驗動物遺傳質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)奠定基礎(chǔ)。 實驗采用生物素標(biāo)記的(GGAT)4寡核苷酸探針對C57BL/6J、BALB/c和DBA/2三個近交系擴大群種鼠進行了DNA指紋分析，發(fā)現(xiàn)在2.2Kb-9.4Kb之間均出現(xiàn)了10條以上清晰可見、易于判別的圖譜條帶。同一品系近交系小鼠DNA指紋圖帶

3、相一致，其相似系數(shù)為0.95-1.0；而不同品系近交系小鼠的DNA指紋圖帶差異很大，其相似系數(shù)僅為0.21-0.35。結(jié)果證明生物素標(biāo)記的(GGAT)4寡核苷酸探針具有高度多態(tài)性，用其標(biāo)記的DNA指紋技術(shù)能夠?qū)幌敌∈筮M行遺傳監(jiān)測。 近交系小鼠生產(chǎn)擴大群只能繁殖四代，第五代可能出現(xiàn)遺傳污染。因此，本研究采用生物素標(biāo)記的(GGAT)4寡核苷酸探針對第四代和第五代擴大群繁育的C57BL/6J、BALB/c和DBA/2三個近交品系的

4、小鼠進行了遺傳質(zhì)量檢測，發(fā)現(xiàn)第四代近交系小鼠品系內(nèi)DNA指紋圖帶相一致，其相似系數(shù)為0.95-1.0。而第五代近交系小鼠DNA指紋圖帶有差異，其相似系數(shù)為0.67-0.79。這表明第四代擴大群沒有發(fā)生遺傳突變或污染，而第五代擴大群已發(fā)生遺傳突變或污染。 生化標(biāo)記方法是國標(biāo)規(guī)定的近交系小鼠遺傳監(jiān)測的一種常用方法。通過對蘭州大學(xué)實驗動物中心生產(chǎn)擴大群繁育的C57BL/6J、BALB/c和DBA/2三個近交系擴大群的第四代和第五代進行

5、常規(guī)生化標(biāo)記分析，發(fā)現(xiàn)被檢的十三個生化基因位點(Cfar-2，Es-1，Es-3，Gpil，Hbb，Idh-1，Trf，Ce-2，Es-10，Mod-1，Pgm-1，Gpd-1 and Akp-1)中，三個近交品系小鼠第四代的生化基因位點與國標(biāo)完全一致。第五代的生化基因位點中，BALB/c小鼠的十三個生化基因位點與標(biāo)準(zhǔn)一致；DBA/2小鼠有一個位點即Idh-1出現(xiàn)異常；C57BL/6小鼠的十個生化基因位點與標(biāo)準(zhǔn)一致，有三個位點即1dh-

6、1、Es-3、Es-1出現(xiàn)異常。將C57BL/6J、BALB/c和DBA/2近交系小鼠第四代和第五代的DNA指紋圖與常規(guī)生化標(biāo)記分析法比較，發(fā)現(xiàn)DNA指紋技術(shù)顯示異常的群體生化標(biāo)記分析未見異常，生化標(biāo)記分析顯示可疑或異常的群體內(nèi)DNA指紋圖差異明顯，表明DNA指紋技術(shù)在近交系小鼠擴大群遺傳檢測中比生化標(biāo)記分析更加靈敏。 為了解近交系擴大群小鼠的各項血液指標(biāo)變化情況，本研究對近交系擴大群小鼠的第一代至第五代近交系小鼠進行了血液分析