PPARγ拮抗劑發(fā)現(xiàn)及15d-PGJ-,2-在PPARγ-TGFβ-Smad2通路中的調控作用研究.pdf

1、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)是核受體家族中的一個非常重要的成員，它們在調節(jié)脂類和糖代謝平衡方面具有重要的功能?，F(xiàn)在PPARγ已經(jīng)作為一個重要的藥物篩選靶標用于治療糖尿病、炎癥、壞脂血、高血壓和癌癥等。研究發(fā)現(xiàn)，相對于PPARγ的激動劑，PPARγ的拮抗劑和半激動劑在治療糖尿病的過程中，除了能有效的保持胰島素敏感性外，還表現(xiàn)出更小的副作用。因此，PPARγ拮抗劑具有更佳的成藥價值。本文通過運用基于表面等離子共振(SPR)技術

2、的Biacore體外篩選系統(tǒng)，我們發(fā)現(xiàn)二肽H-Trp-Glu-OH(G3335)與PPARγ具有很高的選擇性結合活性，并且G3335可以抑制羅格列酮誘導增強的PPARγ/RXR相互作用。在此基礎上，運用酵母雙雜交和哺乳動物反式激活實驗，進一步證實了G3335具有潛在的PPARγ拮抗活性。此外，同源模建和分子對接發(fā)現(xiàn)PPARγ的Cys285殘基在G3335/PPARγ相互作用中具有非常重要的貢獻，同時點突變實驗也證實了這一點。因此，通過發(fā)

3、現(xiàn)PPARγ拮抗劑G3335，我們建立了一套非常有效的PPARγ拮抗劑篩選平臺，而G3335則可能成為一個先導化合物用于治療糖尿病的研究。此章數(shù)據(jù)發(fā)表于ChemBioChem(2006)。
　　 15d-PGJ2是PPARγ的一個天然激動劑，它能夠促進脂肪細胞生成，并且在調節(jié)炎癥發(fā)生過程中具有重要作用。除此之外，有研究報道15d-PGJ2還能夠調節(jié)細胞因子Smad2的活性。然而到目前為止還沒有報道定量的分析這種效應，并且在15d

4、-PGJ2調控Smad2的活性是否通過PPARγ的問題上，還存在很大的爭議。在此，我們運用IN Cell Analyzer1000儀器和核轉運分析模塊(NucleusTrafficking Analysis Module)軟件，定量的研究了15d-PGJ2調控TGFβ誘導的Smad2在細胞內(nèi)的轉位作用。結果表明：(1)、TGFβ能夠有效的誘導Smad2從細胞質轉移到細胞核內(nèi)(EC50=8.83 pM)；(2)、15d-PGJ2能夠通過P

5、PARγ有效的抑制TGFβ誘導的Smad2在細胞內(nèi)的轉位作用；(3)、在PPARγ/TGFβ/Smad2信號通路中，15d-PGJ2與PPARγ的另一個激動劑——羅格列酮對此通路具有完全相反的調控作用，這表明它們可能以不同的方式激活PPARγ。因此，本文除了定量的研究了15d-PGJ2和TGFβ在PPARγ/TGFβ/Smad2信號通路中的調控作用外，還為研究PPARγ的激動劑在復雜的藥理學通路中的調控作用提供了一個實驗依據(jù)。此章結果發(fā)