犬顱腦槍彈傷后腦組織中熱休克蛋白70、c-myc、bcl-2和細胞凋亡表達及意義的實驗研究.pdf

1、顱腦火器傷具有死亡率﹑致殘率高,救治難度大等特點,是戰(zhàn)創(chuàng)傷研究的重點之一。顱腦火器傷的死亡率自二戰(zhàn)以來一直保持在30％-40％，在火器傷致死的人數(shù)中，顱腦傷幾乎占50％。由于現(xiàn)代戰(zhàn)爭的不斷發(fā)生，所以人們對顱腦火器傷的研究應(yīng)更加深入，以降低其死亡率，提高治愈率。本實驗采用低速德國小口徑步槍射擊犬頭顱，建立犬腦貫通傷(penetrating cranioc-erebral injury，PCI)和腦切線傷（tangent brain inj

2、ury，TBI）模型，研究犬顱腦火器傷后熱休克蛋白70, c-myc,Bcl-2 以及細胞凋亡的表達和調(diào)控機制。探討其在顱腦火器傷中的作用,為臨床救治提供重要理論依據(jù)。 一、腦槍彈傷模型建立及相關(guān)生理、病理指標觀察 目的：建立犬顱腦槍彈傷模型，檢驗該模型用于顱腦槍彈傷研究的可行性。 方法：雜種犬14 只，采用低速德國小口徑步槍子彈致TBI 組和PCI 組。觀察實驗犬傷后相關(guān)生理與病理指標的變化。 結(jié)果：T

3、BI 組和PCI 組實驗犬傷后存活時間較長。兩組均在傷后數(shù)分鐘至1h 內(nèi)出現(xiàn)明顯的心率減慢、血壓下降、頸動脈血流量減少、呼吸暫?；驕p慢、顱內(nèi)壓(intracranial pressure，ICP)逐漸升高。兩組挫傷區(qū)病理表現(xiàn)為腦血管擴張、充血、血管周圍環(huán)形出血、神經(jīng)細胞輕度缺血、壞死及腦水腫(brain edema，BE)。 結(jié)論：上述模型均具有彈道傷恒定、重復(fù)性好、傷后動物存活時間較長等特點。 二、犬顱腦槍彈傷后腦組織

4、中熱休克蛋白70 和c-myc 的表達 目的：研究犬槍彈傷后腦組織中熱休克蛋白70（Heat shock protein70，HSP70）和快反應(yīng)蛋白c-myc 的變化規(guī)律。 方法：24 只雜種犬，隨機分為對照組，損傷組。采用德國小口徑步槍子彈致犬顱腦額葉切線傷（tangent braininjury， TBI）。用免疫組織化學方法檢測傷后30min、2h、6h、12h 和24h 各不同時期彈道挫傷區(qū)、震蕩區(qū)、海馬及腦干

5、神經(jīng)元中HSP70 和c-myc 蛋白的表達。 結(jié)果：對照組腦神經(jīng)元中HSP70 和c-myc 蛋白表達弱，槍彈傷組挫傷區(qū)、震蕩區(qū)、海馬及腦干神經(jīng)元中HSP70 蛋白2h 開始增加( P<0.05)，6h 時明顯增加，12h 達高峰( P<0.01)，24h 開始下降。C-myc 傷后30min 開始增加( P<0.05)，2h 達高峰( P<0.01)，6h 開始下降，24h 同對照組。且2 種蛋白距傷道越近，表達越明顯。

6、 結(jié)論：HSP70 和c-myc 蛋白在彈道挫傷區(qū)、震蕩區(qū)、海馬及腦干神經(jīng)元均有表達，兩者在腦組織中表達分布范圍基本一致，但c-myc 先于HSP70 表達。 三、犬顱腦槍彈傷后神經(jīng)細胞凋亡及bcl-2 的表達 目的：研究犬顱腦槍彈傷后神經(jīng)細胞凋亡機制及bcl-2 的變化規(guī)律。 方法：建立犬顱腦槍彈傷模型，制備不同時期、不同部位腦組織切片。采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的生物素脫氧尿嘧啶核苷酸缺口末端標記法(T

7、UNEL)檢測腦神經(jīng)細胞凋亡以及用免疫組織化學方法檢測bcl-2 的動態(tài)變化。 結(jié)果：對照組犬偶見神經(jīng)細胞凋亡，神經(jīng)細胞中有微弱bcl-2 的表達，槍彈傷后凋亡神經(jīng)細胞及bcl-2 于2h 開始增加，24h 達高峰，48h 開始下降。不同區(qū)域表達不完全一致。各觀測點神經(jīng)細胞與bcl-2 表達呈負相關(guān)。 結(jié)論：犬腦槍彈傷后神經(jīng)細胞bcl-2 的表達增強，在不同時期、不同部位具有時空規(guī)律性。神經(jīng)細胞的凋亡與凋亡保護基因的調(diào)節(jié)