甲磺酸甲酯對(duì)釀酒酵母S288C DNA損傷及端粒酶活性影響的研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文甲磺酸甲酯對(duì)釀酒酵母S288CDNA損傷及端粒酶活性影響的研究姓名：王嵐申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：于成國(guó)20040301影。24酵母端粒酶的制備，端粒重復(fù)擴(kuò)增法(舢)、聚丙烯酰胺凝膠電泳及硝酸銀染色法檢測(cè)端粒酶活性。25統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果將不同濃度的MMS(001—1mmol／L)作用于釀酒酵母$288C細(xì)胞72h后，分別檢測(cè)其DNA損傷程度及端粒酶活性變化。結(jié)果顯示MMS能夠引起酵母細(xì)胞

2、DNA的損傷，并且隨著MMS濃度的增加DNA損傷程度加重，05％瓊脂糖凝膠電泳及EB染色顯示1mmol／L濃度時(shí)DNA條帶“拖尾”最長(zhǎng)，說(shuō)明損傷最重。同時(shí)MMS明顯提高了各組細(xì)胞的端粒酶活性，甚至在相對(duì)較低濃度(O01mmol／L)下也起作用，但以04mmol／L濃度時(shí)作用活性最高。04mmol／LMMS作用于釀酒酵母$288C細(xì)胞不同時(shí)問(wèn)，結(jié)果顯示隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，DNA的損傷程度加重。同時(shí)端粒酶活性于作用12h時(shí)就有所提高，當(dāng)作用

3、72h時(shí)幾乎達(dá)到未用藥組的15倍，但是在作用96h及120h時(shí)端粒酶活性逐漸下降。如果在加入引物之前將MMS直接加在釀酒酵母$288C細(xì)胞蛋白提取物2h，結(jié)果顯示端粒酶活性沒(méi)有變化，因此排除了MMS對(duì)端粒酶的直接激活作用。討論端粒由雙鏈重復(fù)序列DNA及特異的端粒結(jié)合蛋白組成，能保護(hù)線性染色體的末端。在釀酒酵母中，端粒由大約350bpCl3A／TG㈠重復(fù)序列DNA構(gòu)成。傳統(tǒng)的DNA聚合酶并不能復(fù)制線性染色體末端，這一“末端復(fù)制問(wèn)題”可由端

4、粒酶解決。端粒酶是一種特異性核糖核蛋白逆轉(zhuǎn)錄酶，能夠利用自身RNA亞單位為模板延伸端粒DNA的G鏈。在釀酒酵母中，端粒酶活性的表達(dá)很低，導(dǎo)致漸進(jìn)性端粒縮短伴隨生長(zhǎng)潛能的喪失、染色體不穩(wěn)定及細(xì)胞死亡。一些釀酒酵母細(xì)胞DNA損傷一反應(yīng)基因與人類具有同源性，而且這些基因的突變與人類疾病有關(guān)。一直以來(lái)人們用釀酒酵母細(xì)胞研究DNA損傷反應(yīng)途徑及端粒酶活性關(guān)系，作為認(rèn)識(shí)人體內(nèi)DNA損傷與端粒酶活性和癌變的基礎(chǔ)。多數(shù)能引起DNA損傷的因素與腫瘤的發(fā)生