MAPKs通路在腎缺血-再灌注損傷中的作用及銀杏達(dá)莫注射液的干預(yù).pdf

1、目的：
　　1研究MAPKs信號(hào)通路在大鼠腎缺血-再灌注損傷（RIRI）發(fā)生發(fā)展中的作用;
　　2探討銀杏達(dá)莫注射液(GED)防治RIRI的作用及與MAPKs信號(hào)通路的關(guān)系。
　　方法：
　　1腎缺血-再灌注損傷大鼠模型復(fù)制:雄性SD大鼠50只（體重180～2209），隨機(jī)分成5組(n=10)，即(1)對(duì)照組:按1.8 ml/kg體重尾靜脈注射生理鹽水，每天1次，連續(xù)7天;(2)模型組:按1.8 ml/kg體重尾

2、靜脈注射生理鹽水，每天1次，連續(xù)7天;(3)銀杏達(dá)莫注射液處理（高、中、低）組:按0.9、1.8、3.6 ml/kg體重尾靜脈注射GED每天1次，連續(xù)7天。第8天每組大鼠經(jīng)3％戊巴比妥鈉40 mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉成功后，仰臥位固定，作腹部正中3-4 cm切口，分離腎周組織，暴露雙側(cè)腎臟，游離右側(cè)腎臟結(jié)扎腎蒂并摘除右腎。對(duì)照組不做其他特殊處理，模型組和藥物處理組先用微動(dòng)脈夾夾閉左腎蒂缺血1h，然后移去動(dòng)脈夾再灌注1h建立缺血-再灌

3、注損傷模型。
　　2羥胺法測(cè)定SOD活性，TBA法測(cè)定組織MDA濃度。
　　3用二乙酰-肟法、苦味酸法分別測(cè)定血清BUN、Cr濃度。
　　4取大鼠左腎裝入DEPC水處理的冷凍管-70℃保存，用于RT-PCR檢測(cè)腎組織p38MAPK、JNK mRNA的變化。
　　5 Western blot法檢測(cè)腎組織p-p38MAPK、p-JNK、p38MAPK、JNK蛋白的表達(dá)。
　　6光鏡及透射電鏡下觀察大鼠腎組織的形

4、態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：
　　1和對(duì)照組相比，模型組大鼠Cr(214.2±40.1μ mol/L)、BUN(8.75±1.28 mmol/L)及MDA(11.78±2.32 nmol/mgprot)濃度均增高（P＜0.01），SOD(103.62±6.59 nmol/mgprot)活性顯著下降(P＜0.01)。銀杏達(dá)莫注射液干預(yù)后，Cr、BUN及MDA濃度顯著降低，SOD活性顯著升高，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）;

5、銀杏達(dá)莫不同劑量組之間無明顯差異。
　　2 RT-PCR檢測(cè)腎組織p38MAPK及JNK mRNA的結(jié)果顯示:模型組腎組織p38MAPK(2.1±0.06)、JNK(2.38±0.05) mRNA水平顯著升高(P＜0.01），與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。銀杏達(dá)莫注射液干預(yù)后，腎組織JNK mRNA水平顯著下調(diào)，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);銀杏達(dá)莫不同劑量組之間無明顯差異。
　　3 Western

6、blot檢測(cè)腎組織p-p38MAPK和p-JNK蛋白顯示模型組腎組織p-p38MAPK，p-JNK蛋白水平顯著上升，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。銀杏達(dá)莫注射液顯著下調(diào)腎組織p-p38MAPK(0.49±0.004)，p-JNK(0.808±0.033)蛋白水平，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;銀杏達(dá)莫不同劑量組之間無明顯差異。
　　4光鏡結(jié)果顯示腎臟缺血-再灌注后，大部分腎小球萎縮，腎小管擴(kuò)張，腎小管上皮細(xì)

7、胞變性壞死，脫落，腎間質(zhì)高度擴(kuò)張充血水腫，可見出血區(qū)和大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，銀杏達(dá)莫注射液明顯減輕腎缺血-再灌注損傷的病理改變。銀杏達(dá)莫不同劑量組之間無明顯差異。
　　5電鏡觀察結(jié)果顯示腎臟缺血-再灌注后近曲小管上皮細(xì)胞的線粒體均大量受損，足細(xì)胞空泡化，胞核固縮。銀杏達(dá)莫注射液顯著減輕近曲小管上皮細(xì)胞受損，減少線粒體及足細(xì)胞的損傷。銀杏達(dá)莫不同劑量組之間無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1 MAPKs信號(hào)通路活化介導(dǎo)了腎缺血-