參附注射液對腦缺血再灌注損傷保護作用的系列研究.pdf

1、第一部分線栓法兔局灶性腦缺血/再灌注模型的制作及影像學評價目的：探討建立穩(wěn)定的線栓法兔腦缺血/再灌注模型，并對其進行MR影像學和神經(jīng)功能評價。 方法：健康新西蘭白兔40只，隨機分為三組：A組5只，進行頸內動脈血管造影檢查；B組5只，為假手術組；C組30只，選擇直徑0.45mm的導絲直接從CCA經(jīng)ICA插至MCA起始部，3h后抽回導絲至CCA內進行線栓法局灶性腦缺血/再灌注模型的制作，并利用MRI和神經(jīng)功能缺損評分對模型進行評價。

2、 結果：血管造影可以清晰地顯示頸內動脈的走行及其顱內分支情況，22只動物腦缺血/再灌注模型成功。MRI能清晰顯示腦組織的病理改變，腦缺血/再灌注后1h神經(jīng)功能缺損評分為2.8±0.45。 結論：采用直徑0.45mm的導絲直接從CCA經(jīng)ICA插至MCA起始部，再灌注時，抽回導絲至CCA內可用于建立較穩(wěn)定(22/30)、長期存活并適合影像學研究的腦缺血/再灌注模型。 第二部分兔局灶性腦缺血再灌注損傷后的MRI表現(xiàn)和病

3、理改變對照研究 目的：研究兔局灶性腦缺血/再灌注損傷后的系列MRI動態(tài)演變過程，并將其與病理改變相對照。 方法：健康新西蘭白兔27只，隨機分為二組：A組5只，為假手術組；B組22只，為線栓法局灶性腦缺血/再灌注模型組。于缺血3h/再灌注后1h(4只)、3h、6h、12h、1d、3d、7d(各3只)行頭顱MR掃描，掃描序列包括T1WI、T2WI、FLAIR(液體衰減反轉恢復)、DWI(彌散加權成像)、PWI(灌注加權成像)

4、及強化后T1WI掃描，觀察缺血再灌注后腦組織T2WI、DWI、PWI、強化后T1WI信號參數(shù)以及梗死體積的改變。兔腦切片光鏡HE染色及電鏡下觀察缺血區(qū)組織形態(tài)學變化，同時應用免疫組化法觀察缺血區(qū)GFAP、MAP-2、HSP-70及MMP-9的演變過程。 結果：缺血3h/再灌注后MRI可見左側大腦半球顳頂葉及外側基底節(jié)異常信號。缺血3h/再灌注后1d天內左側大腦半球病變T2信號強度逐漸增加，隨后開始下降，而ADC(表觀彌散系數(shù))值

5、的變化與此相反，缺血再灌注后早期增強MRT1WI可見明顯異常對比增強高信號影。腦梗死體積于缺血再灌注后1d時最大，其與梗死的T2WI信號動態(tài)演變過程呈高度直線相關。以T2WI信號(rSI)為自變量，相對梗死體積(％HLV)為應變量的直線回歸方程為：Y=-6.126+18.6249X。PWI上相對腦血流量(rCBF)左側大腦半球梗死區(qū)表現(xiàn)為持續(xù)低灌注，梗死周圍區(qū)早期表現(xiàn)為高灌注，3d及7d時與對側大腦半球灌注基本相同。光鏡HE染色及電鏡下

6、可見腦組織缺血壞死和細胞水腫于1d時表現(xiàn)最為明顯。免疫組化染色可見缺血中心區(qū)1d時無GFAP及MAP-2染色陽性細胞。梗死周圍區(qū)GFAP陽性細胞染色的積分光密度(OD)值于缺血再灌注后3h開始增加，1d時達到高峰，3d與1d時相似，7d時稍下降。缺血周圍區(qū)MAP-2染色加深，MAP-2陽性細胞染色的積分光密度值(0D)于缺血再灌注后1d時明顯增高，持續(xù)至第7d，高于假手術組及對側大腦半球。腦缺血再灌注后1h即可見HSP-70陽性免疫反應

7、細胞，再灌注后1dHSP-70陽性細胞染色的積分光密度值(0D)達高峰，其后逐漸下降，陽性免疫細胞主要位于缺血灶的周圍。腦缺血再灌注后3h缺血中心區(qū)周邊的MMP-9陽性細胞染色的積分光密度值(OD)升高，于1d內達到高峰，7d時陽性細胞染色強度下降。 結論：兔局灶性腦缺血/再灌注損傷后的系列MRI動態(tài)演變過程與光鏡HE染色、電鏡及GFAP、MAP-2、HSP-70、MMP-9免疫組化染色的結果是一致。 第三部分參附注射液

8、對兔局灶性腦缺血/再灌注損傷保護作用的實驗研究 目的：應用MRI研究參附注射液對兔局灶性腦缺血/再灌注損傷后的神經(jīng)保護作用，并將與其與病理改變相對照，以了解其可能機制。 方法：健康新西蘭白兔54只，隨機分為三組：A組5只，為假手術組；B組19只，為線栓法局灶性腦缺血/再灌注模型+5％葡萄糖注射液組，即對照組，C組30只，為線栓法局灶性腦缺血/再灌注模型+參附注射液組，即治療組。于缺血3h/再灌注后1h、3h、6h、1d、

9、3d、7d行頭顱MR掃描，掃描序列包括T1WI、T2WI、FLAIR(液體衰減反轉恢復)、DWI(彌散加權成像)、PWI(灌注加權成像)及強化后T1WI掃描，觀察缺血再灌注后參附注射液治療組與對照組腦組織T2WI、DWI、PWI、強化后T1WI信號參數(shù)以及梗死體積的改變。兔腦切片光鏡HE染色及電鏡下觀察缺血區(qū)組織形態(tài)學變化，同時應用免疫組化法觀察缺血區(qū)GFAP、MAP-2、HSP-70及MMP-9的演變過程。比較并分析參附注射液治療組與

10、對照組MRI及病理學表現(xiàn)的差別以研究其可能的作用機制。 結果：缺血3h/再灌注后MRI可見左側大腦半球顳頂葉及外側基底節(jié)異常信號。B組缺血3h/再灌注后1d天內左側大腦半球病變T2信號強度逐漸增加，隨后開始下降，而ADC(表觀彌散系數(shù))值的變化與此相反。C組與B組相比ADC值的變化沒有太大差別，但T2WI信號的演變不同，其高峰時間提前，而且峰值較對照組減低。強化后MRT1WI異常對比信號增高影C組輕于B組，治療組血腦屏障的損傷程

11、度較對照組輕，最終梗死體積小于對照組。參附注射液治療組梗死周圍區(qū)高灌注比對照組稍有降低的趨勢。光鏡HE染色及電鏡下腦組織缺血壞死和細胞水腫B組于1d時表現(xiàn)最為明顯，而C組在6h內表現(xiàn)最為明顯。免疫組化染色可見缺血中心區(qū)1d時無GFAP及MAP-2染色陽性細胞。B組免疫組化染色結果與上部分兔局灶性腦缺血再灌注模型組相同，C組參附注射液治療組缺血中心區(qū)范圍小于B組對照組，其梗死周圍區(qū)GFAP陽性細胞染色的積分光密度(OD)值于缺血再灌注后1

12、h即開始增高，1d時達高峰，隨后逐漸下降。C組梗死周圍區(qū)MAP-2染色也于1d時增加，持續(xù)至第7d，染色強度高于B組對照組。B組與C組腦缺血再灌注后1h均可見HSP-70陽性免疫反應細胞，再灌注后1dHSP-70陽性細胞染色的積分光密度值(OD)達高峰，其后逐漸下降，但C組HSP-70陽性細胞染色強度的峰值高于B組。C組參附注射液治療組MMP-9陽性細胞染色強度也于3h后開始增高，1d時的積分光密度值(OD)與6h時比較無顯著增加，但低