茶多酚對高尿酸血癥模型大鼠腎內(nèi)血管損傷的干預(yù)機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的:
　　高尿酸血癥(hyperuricemia，HUA)是慢性腎臟病(chronic kidneydisease，CKD)患者常見表現(xiàn)。同時(shí)，尿酸升高也與心血管疾病(cardiovascular disaese，CVD)死亡率的增加密切相關(guān)。因此，HUA可能是在CKD與CVD之間起聯(lián)系作用的橋梁。HUA可造成腎血管損傷，腎血管損傷進(jìn)一步加快CKD進(jìn)展，然而有關(guān)HUA時(shí)腎血管損傷的具體調(diào)控機(jī)制尚未完全闡明。Notch信號通

2、路是人類生長和疾病過程中涉及血管發(fā)生和形成的一個(gè)重要傳導(dǎo)通路;日益增多的證據(jù)表明Notch信號通路對血管及其細(xì)胞命運(yùn)起關(guān)鍵性的調(diào)控作用;Notch通路的異常改變也與人類多種血管疾病發(fā)生密切相關(guān)。然而，在高尿酸血癥CKD模式下Notch信號是否參與腎血管損傷的調(diào)控，目前尚未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本文首先觀察氧嗪酸誘導(dǎo)高尿酸血癥殘余腎(remnant kidney，RK)模型大鼠腎血管損傷時(shí)Notch配體Jagged-1表達(dá)，接著進(jìn)一步分析其可能

3、介導(dǎo)血管損傷的調(diào)控機(jī)制，并以此為切入點(diǎn)探討茶多酚(tea polyphenol，TP)對高尿酸血癥RK模型大鼠腎血管損傷的治療作用，以期為CKD腎血管損傷的臨床治療提供新的理論依據(jù)。
　　材料與方法:
　　采用兩步法制備5/6腎切除模型，氧嗪酸飼喂誘導(dǎo)高尿酸血癥。32只雌性SD大鼠隨機(jī)分為四組:假手術(shù)組(SO，n=8);5/6腎切除組(RK，n=8);氧嗪酸誘導(dǎo)5/6腎切除高尿酸血癥組(RK+OA，n=8);氧嗪酸誘導(dǎo)5/6

4、腎切除高尿酸血+茶多酚處理組(RK+OA+TP，n=8)。觀察24小時(shí)尿蛋白定量、血生化和腎臟病理改變。采用moticmedical6.0數(shù)碼醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)對腎小球前動脈（弓狀動脈、小葉間動脈、入球小動脈）進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析;采用原位雜交法檢測Jagged1mRNA在球前動脈表達(dá);采用免疫組化檢測Jagged1、Notch1細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域(Notch1 intracellular domain，Notch1-ICD)、發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子5(

5、hairy and enhancer of split5，Hes5)、磷酸化信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活物3（phosphorylated signal transducers and activators oftranscription3，P-STAT3）、錳超氧化物岐化酶(manganese superoxide dismutase，MnSOD2)及黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase，XO)在球前動脈中的表達(dá);采用ELISA檢測大

6、鼠血清中活性氧(reactive oxygenspecies，ROS)水平。
　　結(jié)果:
　　1.與SO組相比較，血清尿酸在RK組（86.50±13.81μmol.L-1 vs98.51±17.75μmol.L-1,P＞0.05）和RK+OA組（86.50±13.81μmol.L-1 vs207.23±29.82μmol.L-1，P＜0.01）升高。RK+OA組血尿酸升高更顯著，與RK組相比有明顯差異(98.51±17.75

7、μmol.L-1 vs207.23±29.82μmol.L-1，P＜0.01)。
　　2.與SO組相比較，反映腎臟功能的血生化參數(shù)和結(jié)構(gòu)改變的病理評分在RK和RK+OA組明顯增加(P＜0.05)，RK+OA組增加更顯著，與RK組比較有明顯差異(P＜0.05)。隨著血尿酸水平增加，反映腎臟功能的血生化參數(shù)和結(jié)構(gòu)改變的病理評分增加(P＜0.05)。
　　3.與SO組相比較，RK組和RK+OA組腎小球前動脈中層/管腔值明顯增高(P

8、＜0.01)。其中，RK+OA組較RK組增高更顯著，表現(xiàn)為弓狀動脈（5.71±0.68 versus3.44±0.56，P＜0.01）;小葉間動脈（5.18±0.91 versus3.77±1.04，P＜0.01）;入球小動脈（8.21±0.78 versus5.05±0.97，P＜0.01）。隨著血尿酸水平增加，腎小球前動脈中層/管腔值增加;隨著腎小球前動脈中層/管腔值增加，反映腎臟功能的血生化參數(shù)和結(jié)構(gòu)改變的病理評分增加(P＜0.0

9、5);24小時(shí)尿蛋白定量增加(P＜0.05)。
　　4.與SO組相比較，RK組和RK+OA組腎小球前動脈Jagged-1表達(dá)明顯減少（P＜0.01），Jagged-1 mRNA表達(dá)亦明顯減少(P＜0.01)，且兩者表達(dá)均與動脈中層/管腔值呈負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。兩者表達(dá)在RK+OA組減少更顯著，與RK組比較有明顯差異(P＜0.01)。
　　5.與SO組相比較，RK組和RK+OA組腎小球前動脈中Notch1-ICD、Hes5

10、、P-STAT3和MnSOD2表達(dá)均下調(diào)(P＜0.01);其中RK+OA組下調(diào)更明顯，與RK組比較有顯著差異(P＜0.05)。
　　6.與SO組相比較，RK組和RK+OA組腎小球前動脈中XO表達(dá)上調(diào)(P＜0.01);RK+OA組上調(diào)更明顯，與RK組比較有顯著差異(P＜0.01)。
　　7.Jagged-1、Notch1-ICD、Hes5、STAT3和MnsOD2表達(dá)水平隨動脈損傷程度加重逐漸下調(diào)(P＜0.01);然而，XO表

11、達(dá)水平隨動脈損傷程度加重上調(diào)(P＜0.01)。
　　8.隨著Jagged-1表達(dá)下調(diào)，Notch1-ICD、Hes5、STAT3和MnSOD2表達(dá)下調(diào)(P＜0.01)。
　　9.血清ELISA顯示ROS水平隨動脈損傷程度加重而升高(P＜0.01);隨XO表達(dá)上調(diào)而升高(P＜0.01)。
　　10.比較RK組和RK+OA組，TP處理組腎小球前動脈中層管腔比值顯著減少(P＜0.01); XO在TP處理組腎小球前動脈表達(dá)顯著

12、降低(P＜0.01); TP處理組血清ROS水平顯著減少(P＜0.01)。
　　11.比較RK組和RK+OA組，TP處理組Jagged-1和Jagged-1 mRNA在腎小球前動脈表達(dá)顯著上調(diào)（P＜0.01）;Notch1-ICD、Hes5、P-STAT3、MnSOD2在腎小球前動脈表達(dá)亦顯著上調(diào)(P＜0.05)。
　　12.相關(guān)分析證實(shí)隨著Jagged-1表達(dá)上調(diào)，Notch1-ICD、Hes5、P-STAT3、MnSOD

13、2在不同分組腎小球前動脈中表達(dá)亦逐漸上調(diào)(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　1.高尿酸血癥加重腎小球前動脈病變，腎小球動脈動脈病變促進(jìn)腎臟病進(jìn)展。
　　2.由于血管內(nèi)XO表達(dá)增加，產(chǎn)生ROS增多導(dǎo)致高尿酸血癥RK大鼠腎小球前動脈損傷;由于血管內(nèi)MnSOD2活性下降，清除ROS能力減少導(dǎo)致高尿酸血癥RK大鼠腎小球前動脈損傷;在高尿酸血癥RK大鼠模式下，腎小球前動脈內(nèi)Notch信號通路活性下調(diào)，并協(xié)同JAK-STAT通路作