鋸緣青蟹一種新的陰離子抗菌肽scygonadin及其基因的分離與鑒定.pdf

1、鋸緣青蟹Scylla serrata (Forsk？l,1775)是我國最重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)蟹類之一。本論文運(yùn)用液相色譜技術(shù)分離純化獲得一種新抗菌肽,命名為Scygonadin,利用分子生物學(xué)技術(shù)克隆獲得Scygonadin全長基因序列,利用生物信息學(xué)的方法闡明其基因結(jié)構(gòu),運(yùn)用分子生物學(xué)的方法分析該基因在鋸緣青蟹體內(nèi)各組織器官中的轉(zhuǎn)錄表達(dá)情況等,為闡明鋸緣青蟹的先天性免疫及生殖免疫機(jī)制奠定基礎(chǔ)。通過研究獲得了如下結(jié)果：1、分離純化獲得一

2、種新抗菌肽。以鋸緣青蟹的精液為材料,通過酸性溶液萃取,聯(lián)合利用陽離子交換層析和反相高效液相層析技術(shù)進(jìn)行分離純化,獲得一種單成份,Tricine-SDS-PAGE測定其分子量約為10.8 kDa。胰蛋白酶裂解該多肽后,用MALDI-ToF-MS法分析了肽指紋圖譜。Edman降解法測定其N-端20個氨基序列為H-GQALNKLMPKIVSAIIYMVG-OH,BLAST進(jìn)行數(shù)據(jù)庫檢索,發(fā)現(xiàn)與已知抗菌肽的同源性很低,是一種新的抗菌肽,由于從S

3、cylla serrata的雄性生殖腺中獲得,具有抗菌活性,故命名為Scygonadin。2、克隆獲得Scygonadin全長cDNA序列。利用簡并反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Degenerated RT-PCR)和快速擴(kuò)增cDNA末端(RACE)技術(shù),克隆獲得了Scygonadin全長cDNA序列,并登錄GenBank數(shù)據(jù)庫,登錄號：AY864802。Scygonadin cDNA全長539 bp (不包括poly A),其中5’非翻譯區(qū)