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文檔簡介
1、本試驗旨在研究食淀粉乳桿菌發(fā)酵產(chǎn)物以及發(fā)酵產(chǎn)物中不同分子量范圍分泌蛋白的抗RV的抗病毒效應(yīng),分析膽鹽、胰酶處理前后各分子量段的分泌蛋白抗病毒能力,比較它們之間的差異。本研究首先采用硫酸銨沉淀法提取食淀粉乳桿菌發(fā)酵產(chǎn)物中總蛋白,然后分別用孔徑為3KD、10KD、50KD的超濾離心管過濾并獲取發(fā)酵產(chǎn)物中的1-3 KD、3KD-10 KD、10-50 KD、50 KD以上四段分子量范圍內(nèi)蛋白。
實驗以IPEC-J2細(xì)胞為平臺,首先采
2、用MTT法和Karber法檢測食淀粉乳桿菌的MRS正常培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物、去蛋白MRS培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物、總蛋白以及各分子量段蛋白的抗病毒能力。
檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),食淀粉乳桿菌的MRS正常培養(yǎng)發(fā)酵產(chǎn)物的抗病毒作用最強(qiáng),去蛋白質(zhì)MRS培養(yǎng)發(fā)酵產(chǎn)物、總蛋白以及各分子量段蛋白均具有抗病毒作用,且病毒抑制率:MRS正常培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物>去蛋白質(zhì)MRS培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)物>總蛋白>1-3 KD分子量段蛋白>3-10KD分子量段蛋白>10-50 KD分子量段
3、蛋白>大于50KD分子量段蛋白。
其次,選擇分泌蛋白各分子量段,分別使用胰酶、豬膽鹽單獨處理和混合處理,接種于IPEC-J2細(xì)胞,初步模擬腸道內(nèi)環(huán)境;再次采用MTT法和Karber法檢測抗病毒活性。結(jié)果發(fā)現(xiàn),經(jīng)胰酶、豬膽鹽以及胰酶膽鹽混合物處理過的蛋白與處理前相比,其抗病毒活性變化差異不顯著(P>0.05),說明各分子量段的分泌蛋白均具有耐胰酶、耐膽鹽的特性。
將總蛋白液相色譜-質(zhì)譜分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn),未發(fā)現(xiàn)1-3 KD
4、分子量段范圍內(nèi)的蛋白(僅在Tricine-SDS-PAGE電泳檢出),3-10 KD分子量段范圍內(nèi)的蛋白檢測到一種,10-50 KD分子量段范圍內(nèi)的蛋白有24種,大于50KD分子量段的蛋白有21種。其中大多蛋白功能已經(jīng)明確,少數(shù)功能還有待研究。
為進(jìn)一步探討抗RV病毒的機(jī)制,根據(jù)蔗糖對豬的小腸上皮細(xì)胞的免疫增強(qiáng)作用,實驗采用蔗糖聯(lián)合總蛋白檢測其混合物的抗病毒作用,實驗結(jié)果顯示,單獨蔗糖組與病毒組抗病毒能力差異不顯著(P>0.0
5、5),蔗糖聯(lián)合總蛋白組與總蛋白組抗病毒能力差異也不顯著(P>0.05)。
由于乙酸在腸道內(nèi)含量較高,所以本實驗采用MTT法,進(jìn)行單獨乙酸、乙酸與總蛋白聯(lián)合使用的抗病毒作用,結(jié)果顯示單獨乙酸抗病毒能力與病毒組比較差異不顯著(P>0.05),乙酸聯(lián)合總蛋白抗病毒能力強(qiáng)于單獨使用蛋白組,且差異顯著(P<0.05),說明乙酸加強(qiáng)了總蛋白的抗病毒作用,提示短鏈脂肪酸中的乙酸可以加強(qiáng)食淀粉乳桿菌的抗病毒作用。
綜上所述,食淀粉乳
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