脂質體轉染AFP構建樹突狀細胞肝癌瘤苗及其體內外特異性抗肝癌效應的實驗研究.pdf

1、復旦大學博士學位論文脂質體轉染AFP構建樹突狀細胞肝癌瘤苗及其體內外特異性抗肝癌效應的實驗研究姓名：范強申請學位級別：博士專業(yè)：組織學與胚胎學指導教師：鐘翠平2001.10.1中定掬婺子表達。3、用脂質體可以成功地轉染外源性基因，構建AFPDC肝癌瘤苗，F(xiàn)ACS證實轉染率達12％。免疫組化、SDS—PAGE蛋白電泳和Westernblot方法均證實目的基因獲得有效表達、并能分泌到培養(yǎng)上清中。轉基因產生的AFP并不誘導DC凋亡，反能促進D

2、C的DNA合成。4、RT—PCR、FACS和免疫細胞化學等方法檢測發(fā)現(xiàn)，AFPDC肝癌瘤苗可以明顯提高ILl2的合成和分泌；明顯上調B7分子和MHC分子表達。MLR功能大幅提高，CD4和CD8T細胞的增殖都明顯。5、AFPDC肝癌瘤苗可刺激產生HepaI一6特異性CTL，F(xiàn)ACS、RTPCR和免疫組化顯示，DC瘤苗組T細胞合成、分泌IFN—Y增加。MTT法證實特異性體外殺傷率達到4834％(40：1)。6、體內實驗表明，用AFP—DC瘤

3、苗可以明顯減緩、抑制皮下移植瘤生長，甚至消失。AFPDC瘸苗回輸?shù)膶嶒灲M，五只小鼠(一只意外死亡)有四只存活，其中兩只小鼠的皮下移植瘤消失，一只瘤體縮小?？蛰d體和空白對照組，各有一只小鼠的皮下移植瘤消失，其余小鼠的瘤體有不同程度的減小，但空載體組一只小鼠因瘤體增大而死亡?；A對照組的小鼠全部死亡。7、免疫保護實驗發(fā)現(xiàn)，AFPDC瘤苗不能完全抵御肝癌細胞的攻擊，五只小鼠中有三只皮下形成移植瘤，基礎對照組小鼠全部成瘤，空載體和空白對照組I各

4、有四只成瘤。但未成瘤的小鼠均可以抵御第二次腫瘤攻擊?！Y論：1、低劑量AFP脈沖DC，可以刺激DC的增殖，七調其B7分子表達和提高MLR水平。2、脂質體轉基因可獲得有效表達，制備的AFPDC肝癌瘤苗能夠上調1L12表達，升高表面分子，刺激T細胞增殖并促進其分泌IFNY。4、以AFP為靶點構建的DC瘤苗，刺激機體產生特異性T細胞，回輸瘤苗可產生不同程度的抗肝癌治療和預防作用。rf創(chuàng)新點及意義：＼1根據(jù)DC生長發(fā)育過程中粘附性能不同的特點，