胡麻油煙凝聚物致人胚肺二倍體細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化作用研究.pdf

1、目的：通過建立人胚肺二倍體細(xì)胞體外惡性轉(zhuǎn)化模型，胡麻油煙凝聚物（SOFA）作為受試物重復(fù)染毒人胚肺二倍體細(xì)胞，觀察并檢測(cè)靶細(xì)胞形態(tài)變化，生長能力（如失去密度依賴性，失去接觸抑制，失去貼壁生長特性等）和生化表型的改變，以及移植于裸鼠體內(nèi)形成腫瘤的能力；流式細(xì)胞術(shù)對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行DNA含量分析，以檢測(cè)SOFA對(duì)人胚肺二倍體細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響，為研究胡麻油煙對(duì)人體潛在的致癌危險(xiǎn)性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）比

2、色法及克隆形成試驗(yàn)，觀察并檢測(cè)SOFA（終濃度分別為25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml）對(duì)人胚肺二倍體細(xì)胞的毒性作用及其對(duì)人胚肺二倍體細(xì)胞克隆形成率的影響，觀察靶細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)、克隆形態(tài)變化、SOFA短期誘導(dǎo)人胚肺二倍體細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)化的作用； SOFA重復(fù)染毒（染毒24h后，終止染毒48h后，再染毒24h）人胚肺二倍體細(xì)胞，以S9混合液作為體外代謝活化系統(tǒng)，表達(dá)培養(yǎng)40d，觀察靶細(xì)胞形態(tài)

3、變化、有無轉(zhuǎn)化灶形成；計(jì)數(shù)Ⅲ型轉(zhuǎn)化灶，計(jì)算轉(zhuǎn)化率；對(duì)Ⅲ型轉(zhuǎn)化灶進(jìn)行分離、表達(dá)培養(yǎng)4w，取表達(dá)培養(yǎng)后的Ⅲ型轉(zhuǎn)化灶細(xì)胞進(jìn)行生物學(xué)性狀檢測(cè)、惡性程度測(cè)定（ConA凝集試驗(yàn)、軟瓊脂培養(yǎng)試驗(yàn)），并將轉(zhuǎn)化細(xì)胞移植于裸鼠體內(nèi)，觀察其致瘤性；采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行DNA含量分析，檢測(cè)SOFA對(duì)細(xì)胞周期及DNA倍體指數(shù)（DI值）的影響，并計(jì)算細(xì)胞增殖指數(shù)PI值，觀察SOFA對(duì)細(xì)胞增殖的影響。 結(jié)果： MTT比色法及克隆形成試驗(yàn)結(jié)果顯示：SO

4、FA重復(fù)染毒人胚肺二倍體細(xì)胞后，終濃度為400μg/ml劑量組對(duì)人胚肺二倍體細(xì)胞生長具有明顯的抑制作用，其OD值與DMSO對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其它劑量組吸光度值雖與DMSO溶劑對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但對(duì)細(xì)胞增殖均有一定的抑制作用，并呈現(xiàn)一定的濃度依賴效應(yīng)（r=－0.430，P<0.01）；人胚肺二倍體細(xì)胞受SOFA重復(fù)攻擊后，細(xì)胞相對(duì)克隆形成率（R-CFE）下降5％~75％，且具有明顯的劑量反應(yīng)關(guān)系（r=

5、–0.917，P<0.05）；靶細(xì)胞及克隆形態(tài)表現(xiàn)出發(fā)生轉(zhuǎn)化的形態(tài)學(xué)改變。細(xì)胞體外惡性轉(zhuǎn)化試驗(yàn)結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)的SOFA可不同程度誘發(fā)人胚肺二倍體細(xì)胞形成Ⅲ型細(xì)胞轉(zhuǎn)化灶，轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長失去接觸抑制性、飽和密度增大、ConA凝集能力增強(qiáng)、錨著依賴性喪失，并具有裸鼠體內(nèi)成瘤性等多種細(xì)胞發(fā)生惡性變的生物學(xué)表型改變。流式細(xì)胞術(shù)DNA含量分析結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)劑量范圍內(nèi)的SOFA可促進(jìn)人胚肺二倍體細(xì)胞加速分裂，S期比率增高，PI值增高，DNA含