二倍體細胞的酶活性動力學及其病毒感染生物學反應(yīng)特征的相關(guān)分析.pdf

1、在病毒性疫苗的研究開發(fā)工作中，人二倍體細胞作為病毒抗原的制備基質(zhì)是整個疫苗研發(fā)及生產(chǎn)質(zhì)量控制的首要選擇。對作為疫苗制備基質(zhì)的人二倍體細胞的遺傳穩(wěn)定性及其病毒感染生物學反應(yīng)特征的相關(guān)分析，將為病毒疫苗的研究及開發(fā)包括疫苗安全性的研究提供更為豐富的資料。
　　從細胞生物學的角度看，細胞特定酶學反應(yīng)特征被認為可以反映細胞的遺傳學特性和生物學性狀?，F(xiàn)有的資料表明，當細胞面臨病毒感染時，其具有天然免疫反應(yīng)性質(zhì)的生物學反應(yīng)事實上是與其自身的生

2、物學性狀相關(guān)的。其中細胞所產(chǎn)生的干擾素反應(yīng)，在病毒疫苗制備技術(shù)工藝上又是一個具有重要意義的質(zhì)量指標，而該指標與細胞增殖過程中的生物學活性狀態(tài)具有直接的相互聯(lián)系。因此，分析細胞酶活性特征與其在病毒感染時的干擾素反應(yīng)強度，顯然對這類細胞用于疫苗制備時的技術(shù)研究具有重要的意義。因此本文采用多種細胞系，多代細胞，通過生化方法檢測細胞內(nèi)乳酸脫氫酶、超氧化物歧化酶、琥珀酸脫氫酶的酶活力變化以鑒定細胞的穩(wěn)定性。實驗結(jié)果表明，人胚肺二倍體細胞（KMB1

3、7細胞）和新型的人胚肺二倍體細胞（N0細胞）在細胞代次超過30代后，細胞內(nèi)的酶活力會發(fā)生一定的變化，乳酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶的酶活力上升，超氧化物歧化酶的酶活力下降，表明這兩種細胞在細胞代次超過30代后，細胞的增殖、代謝等能力會下降，細胞穩(wěn)定性較差，不利于用于疫苗的研發(fā)和生產(chǎn)。Vero細胞和Hela細胞隨著細胞代次增加酶活力無明顯變化，表明這兩種細胞在實驗所采用的細胞代次內(nèi)，細胞的增殖、代謝等能力基本保持穩(wěn)定。
　　本文重點分析了

4、各種酶活性指標的變化與細胞在RNA病毒和DNA病毒感染時所產(chǎn)生的干擾素反應(yīng)的相互聯(lián)系，以及這些相互聯(lián)系所導致的病毒感染滴度的變化情況。做為在細胞核內(nèi)完成增殖和在細胞質(zhì)內(nèi)完成增殖的HSV-1病毒和EV71病毒感染人胚肺二倍體細胞(KMB17、N0)時，其引起IFN-α的相對表達量與細胞的酶活力、細胞的生長狀態(tài)有很大的關(guān)系。當人胚肺二倍體細胞培養(yǎng)到第3天時，細胞酶活力處于上升階段，細胞的生長狀態(tài)較好，當細胞培養(yǎng)到第5天時，細胞酶活力處于穩(wěn)定

5、狀態(tài)，細胞的生長狀態(tài)也維持相對穩(wěn)定，兩種病毒感染培養(yǎng)到第5天細胞引起細胞分泌的IFN-α的相對表達量比感染培養(yǎng)到第3天細胞引起細胞分泌的IFN-α的相對表達量高，而病毒滴度在感染過程中逐漸上升，但隨著干擾素分泌的增加而其增殖逐漸變低的事實，提示了人二倍體細胞在病毒增殖過程中所具有的容納限度，可能與干擾素的產(chǎn)生濃度相關(guān)。當兩種病毒感染培養(yǎng)到第3天和第5天的Hela細胞時，其引起細胞分泌的IFN-α的相對表達量與細胞的酶活力關(guān)系不大，且比感

6、染其他種類細胞分泌的IFN-α的相對表達量低，這提示了該細胞作為一種腫瘤細胞的非限制型特征。反之，兩種病毒感染培養(yǎng)到第3天的Vero細胞引起細胞分泌的IFN-α的相對表達量比感染培養(yǎng)到第5天細胞引起細胞分泌的IFN-α的相對表達量高，且病毒滴度前者也高于后者。這一特征有別于人二倍體細胞，似乎提示了Vero細胞的生物學特性，這些通過研究病毒感染后引起細胞分泌的IFN-α相對表達量的變化與細胞酶活力、細胞生長狀態(tài)之間的關(guān)系的工作，雖然這需要