對(duì)比超聲技術(shù)無(wú)創(chuàng)診斷血管內(nèi)皮炎癥的初步研究.pdf

1、目的 越來(lái)越多的證據(jù)表明動(dòng)脈粥樣硬化(AS)與炎癥有關(guān)。在2002年3月，美國(guó)CDC(CentersforDiseaseControlandPrevention)和AHA(AmericanHeartAssociation)聯(lián)合舉辦了一個(gè)有關(guān)炎癥和心血管病的專(zhuān)題研討會(huì)(CDC/AHAWorkshoponInflammatoryMarkersandCardiovascularDisease)，會(huì)后發(fā)表了一項(xiàng)申明，認(rèn)為炎癥貫穿了AS的

2、全部病理過(guò)程，包括AS斑塊的啟動(dòng)、增長(zhǎng)和并發(fā)癥，并提出了“炎性瀑布(inflammatorycascade)”的概念，同時(shí)還指出炎性瀑布還可出現(xiàn)在周?chē)鶤S以及系統(tǒng)性炎癥和局部感染等情況下。且一系列的臨床實(shí)驗(yàn)也證明了炎性標(biāo)記物的升高和心血管疾病和周?chē)鷦?dòng)脈有相關(guān)關(guān)系。但是到目前為止，循環(huán)血中的炎性標(biāo)記物也不能預(yù)測(cè)AS的范圍；在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方面也存在方法學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)化和測(cè)值的評(píng)估等問(wèn)題。因此有必要尋找一種更好的方法來(lái)檢測(cè)炎癥。Lindner和本實(shí)驗(yàn)

3、室周穎等發(fā)現(xiàn)在損傷的血管內(nèi)皮上有較多的白細(xì)胞黏附，而正常的血管內(nèi)皮則白細(xì)胞黏附比較少；還發(fā)現(xiàn)白蛋白微泡和脂質(zhì)微泡造影劑可以與激活的白細(xì)胞大量結(jié)合。他們的研究還表明：白蛋白微泡是通過(guò)整和素的介導(dǎo)與白細(xì)胞黏附分子結(jié)合；脂質(zhì)微泡是通過(guò)補(bǔ)體的介導(dǎo)與白細(xì)胞黏附分子(調(diào)理素)結(jié)合，脂質(zhì)微泡與“炎癥”組織小靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的結(jié)合效率明顯優(yōu)于白蛋白微泡。此現(xiàn)象為對(duì)比超聲檢測(cè)血管內(nèi)皮炎癥提供了理論依據(jù)。本研究擬從以下幾個(gè)方面探討應(yīng)用對(duì)比超聲技術(shù)無(wú)創(chuàng)早期診斷內(nèi)

4、皮炎癥的可行性： (1)應(yīng)用缺血再灌注方法建立兔腎血管內(nèi)皮損傷炎癥模型，探尋白蛋白微泡造影劑在對(duì)比超聲中無(wú)創(chuàng)檢出缺血再灌注后微血管內(nèi)皮炎癥的可行性；(2)建立制備普通脂質(zhì)微泡和含磷脂酰絲氨酸的脂質(zhì)微泡的方法學(xué)，并對(duì)微泡進(jìn)行測(cè)定及評(píng)價(jià)其聲學(xué)顯像效果；(3)應(yīng)用缺血再灌注方法建立鼠腎血管內(nèi)皮損傷炎癥模型，探尋應(yīng)用白蛋白微泡、磷脂酰絲氨酸脂質(zhì)微泡和普通脂質(zhì)微泡在對(duì)比超聲中無(wú)創(chuàng)檢出微血管內(nèi)皮炎癥的可行性。并比較三種微泡在檢測(cè)微血管內(nèi)皮炎

5、癥方面哪一種微泡更具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。 方法 一、建立兔腎的缺血再灌注模型，并經(jīng)耳緣靜脈注入白蛋白微泡行聲學(xué)造影，采用低機(jī)械指數(shù)(MI=0.18)觸發(fā)成像，觸發(fā)間隔為15s，并用特定的軟件進(jìn)行分析，探尋應(yīng)用白蛋白微泡聲學(xué)造影劑在對(duì)比超聲中無(wú)創(chuàng)檢出血管內(nèi)皮炎癥的可行性。 二、脂質(zhì)體微泡的制備和微泡的測(cè)定及其聲學(xué)顯像效果的評(píng)定： 稱取一定比例的DPPC，DPPA，PEG-4000(或再加入DPPS)于三頸瓶中

6、，加入蒸餾水混勻，通入全氟丙烷飽和溶液，利用剪切方法，制得包裹全氟丙烷氣體的脂質(zhì)微泡(本文中根據(jù)是否添加DPPS將兩種脂質(zhì)微泡暫分別命名為：普通脂質(zhì)微泡及含磷脂酰絲氨酸微泡)，分裝于安瓿中，冷藏保存?zhèn)溆?。采用?kù)爾特計(jì)數(shù)儀對(duì)微泡進(jìn)行測(cè)定，并通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)犬經(jīng)股靜脈注射自制脂質(zhì)微泡造影劑，行犬的心臟及腎臟聲學(xué)造影評(píng)價(jià)其聲學(xué)造影效果。 三、應(yīng)用對(duì)比超聲技術(shù)探討白蛋白微泡、普通脂質(zhì)微泡及含磷脂酰絲氨酸微泡檢測(cè)腎臟血管內(nèi)皮炎癥的應(yīng)用價(jià)值：

7、 首先建立鼠腎缺血再灌注血管內(nèi)皮損傷模型，血管內(nèi)皮損傷的炎癥程度通過(guò)免疫組化的病理切片和髓過(guò)氧化物酶的活性來(lái)評(píng)價(jià)。經(jīng)頸靜脈隨機(jī)注射白蛋白微泡造影劑、普通脂質(zhì)微泡造影劑或含磷脂酰絲氨酸微泡造影劑。采用高機(jī)械指數(shù)(MI=0.58)觸發(fā)成像的方式成像，以健側(cè)腎為對(duì)照，采集并比較其本底、造影狀態(tài)下即刻、觸發(fā)間隔為1s、15s的圖像。用特定的軟件進(jìn)行分析，判定檢測(cè)缺血再灌注后腎血管內(nèi)皮炎癥的可行性。 結(jié)果 一、白蛋白微泡檢測(cè)腎

8、臟缺血再灌注(I/R)研究中發(fā)現(xiàn)I/R后微泡達(dá)峰顯影時(shí)間與對(duì)照組相似(均約造影劑注射后75s)，但I(xiàn)/R組出現(xiàn)明顯排空延遲現(xiàn)象，白蛋白微泡在I/R后腎臟中的排空時(shí)間(8.00±1.36min)較正常腎臟顯著延遲(4.25±0.35min)，t=-7.065，p=0.001兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 二、成功制備了普通脂質(zhì)微泡及含磷脂酰絲氨酸微泡。采用庫(kù)爾特計(jì)數(shù)儀測(cè)得含磷脂酰絲氨酸微泡平均直徑為2.85μm,微泡濃度為12×19個(gè)ml

9、；普通脂質(zhì)微泡平均直徑為2.87μm，微泡濃度為1.9×109個(gè)/ml。經(jīng)靜脈注入微泡犬的心臟和腎臟均獲得滿意聲學(xué)造影效果。自制的脂質(zhì)造影劑對(duì)犬的心率及血壓均無(wú)影響。 三、應(yīng)用白蛋白微泡、普通的脂質(zhì)微泡，行聲學(xué)造影。采集聲學(xué)造影即刻圖像、觸發(fā)間隔為1s、15s的圖像，并用特定的軟件進(jìn)行分析。發(fā)現(xiàn)經(jīng)鼠頸靜脈注入微泡15分鐘行腎臟超聲后其即刻的聲學(xué)強(qiáng)度，白蛋白微泡組：對(duì)照組vs缺血再灌注組為(1.66±0.02)vs(4.21±0.

10、01)，t=-362.9，p=.000；普通脂質(zhì)微泡組：對(duì)照組vs缺血再灌注組為(3.88±0.01)vs(5.39±0.01)，t=-358.9，p=.000；均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但其灰階圖像目測(cè)效果欠佳。含磷脂酰絲氨酸微泡，經(jīng)靜脈注入獲得滿意的鼠腎顯像效果，灰階圖像質(zhì)量明顯改善。 結(jié)論 1、經(jīng)靜脈注射“全氟顯”0.5ml后均取得滿意的腎臟顯影效果。 2、白蛋白微泡在腎臟缺血再灌注模型中出現(xiàn)延遲排空現(xiàn)象，此現(xiàn)象為

11、應(yīng)用微泡及對(duì)比超聲無(wú)創(chuàng)檢測(cè)內(nèi)皮炎癥提供了一種可行性，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。 3、成功制備了普通脂質(zhì)微泡和含磷脂酰絲氨酸脂質(zhì)微泡。 4、經(jīng)靜脈注入自制的脂質(zhì)造影劑，均獲得滿意的犬心臟和腎臟聲學(xué)造影圖像，且造影劑對(duì)實(shí)驗(yàn)犬血流動(dòng)力學(xué)無(wú)影響。 5、應(yīng)用白蛋白微泡和普通脂質(zhì)微泡行對(duì)比超聲檢查，目測(cè)灰階圖像效果欠佳，但可以通過(guò)特定的軟件進(jìn)行定量分析，結(jié)果提示可以應(yīng)用對(duì)比超聲技術(shù)檢測(cè)血管內(nèi)皮炎癥。 6、經(jīng)靜脈注入含磷