11C-PD153035PET顯像對非小細胞肺癌EGFR-TKI治療敏感性預測的實驗研究.pdf

1、目的:
　　探討EGFR-TKI敏感性不同的人非小細胞肺癌細胞系11C-PD153035放射性攝取能力與EGFR-TKI敏感性及pEGFR表達之間的關系。通過對荷瘤裸鼠11C-PD153035PET-CT顯像，分析移植瘤顯像結果與EGFR-TKI敏感性、pEGFR蛋白表達之間的關系。為11C-PD153035PET-CT受體顯像應用于臨床NSCLS個體化治療，進行TKI療效預測提供理論基礎。
　　方法:
　　(1)改進

2、合成路線，合成并標記表皮生長因子受體顯像劑11C-PD153035，行11C-PD153035裸鼠體內(nèi)分布實驗。
　　(2)選擇4種人非小細胞肺癌細胞HCC827、PC9、A549和H1975，進行體外培養(yǎng)。采用MTT法檢測厄洛替尼對上述4種細胞作用72小時后的生長抑制率，并計算藥物對4種細胞的IC50。將對數(shù)生長期的HCC827、PC9、A549和H1975與11C-PD153035共同孵育，比較EGFR-TKI敏感性不同的細胞

3、11C-PD153035放射性攝取特征，繪制4種細胞γ攝取值隨時間變化曲線。采用Western Blot方法檢測4種細胞EGFR和pEGFR表達水平，分析各組細胞EGFR、pEGFR表達水平與EGFR-TKI敏感性及與11C-PD153035放射性攝取的相關性。行11C-PD153035放射性攝取體外阻斷實驗，觀察不同濃度厄洛替尼和西妥昔單抗作用下4種細胞pEGFR表達水平及11C-PD153035放射性攝取的變化，并進行兩者的相關性分

4、析。
　　(3)構建EGFR-TKI敏感性不同的人非小細胞肺癌HCC827、PC9、A549和H1975移植瘤裸鼠動物模型，并行11C-PD153035PET-CT顯像。采用免疫組化方法檢測移植瘤標本EGFR、pEGFR表達水平，分析4種移植瘤EGFR、pEGFR表達率、表達水平與EGFR-TKI敏感性及11C-PD153035放射性攝取的相關性。
　　結果:
　　(1)改進11C-PD153035合成路徑，成功合成1

5、1C-PD153035注射劑，其化學純度大于95％，放射化學純度大于99％。標記率達30％-45％。
　　(2)11C-PD153035裸鼠體內(nèi)分布研究顯示:11C-PD153035在腦、腫早期放射性活性高，但下降速度快，可為肺、腦腫瘤的顯像提供良好的正常組織對比，但11C-PD153035在腹部臟器代謝較高且持續(xù)時間較長，腹部臟器的顯像影響較大。
　　(3)EGFR-TKI敏感性不同的4種人非小細胞肺癌細胞厄洛替尼生長抑制

6、實驗顯示:厄洛替尼對4種細胞均有不同程度抑制(p＜0.05)，以HCC827和PC9細胞抑制率較高，其IC50分別為0.0054μM和0.034μM;對A549細胞的抑制率稍低，IC50為0.824μM;對H1975細胞的抑制率最低，IC50達8.339μM。
　　(4)EGFR-TKI敏感性不同的人非小細胞肺癌細胞系11C-PD153035放射性攝取的體外實驗顯示:HCC827為EGFR-TKI高度敏感細胞系，11C-PD153

7、035放射性攝較高、較早，呈遞減型曲線;PC9亦為EGFR-TKI高度敏感細胞系，11C-PD153035放射性攝取隨孵育時間延長呈單峰性改變，峰值γ攝取值明顯高于TKI抵抗的H1975細胞;A549細胞為TKI中度敏感細胞系，雖峰值γ攝取值高于TKI抵抗的H1975細胞，但無顯著性差異。
　　(5)4種人非小細胞肺癌細胞系EGFR、pEGFR表達的檢測顯示:HCC827細胞EGFR表達水平稍高,但與PC9、A549和H1975細

8、胞比較總體無統(tǒng)計學差異.4種細胞pEGFR表達差異較大，HCC827細胞的pEGFR表達最高，高于PC9、A549和H1975細胞;PC9細胞pEGFR表達水平較高，高于H1975細胞;PC9與A549、A549與H1975細胞pEGFR表達無顯著性差異。
　　(6)EGFR-TKI敏感性不同細胞11C-PD153035放射性攝取與細胞pEGFR表達相關性分析顯示兩者呈正相關(r=0.790，p=0.002)。
　　(7)1

9、1C-PD153035放射性攝取的體外阻斷實驗顯示:HCC827、PC9和A549細胞隨厄洛替尼濃度增大，pEGFR表達程度減低(p＜0.05)，H1975細胞pEGFR表達程度則無明顯變化;HCC827和PC9細胞的11C-PD153035放射性攝取值亦隨厄洛替尼濃度增加而減低，A549和H1975細胞11C-PD153035放射性攝取無明顯變化;HCC827和PC9細胞的放射性攝取值與pEGFR表達水平呈正相關。
　　(8)4

10、種人非小細胞肺癌移植瘤PET-CT顯像實驗顯示:HCC827移植瘤于注射11C-PD153035后5分鐘即開始出現(xiàn)腫瘤區(qū)放射性濃聚，40分鐘T/N值達高峰，隨后逐步下降，至掃描結束腫瘤區(qū)放射性濃聚仍保持較高水平;PC9移植瘤放射性攝取低于HCC827移植瘤，T/N值高峰出現(xiàn)較早(25分鐘)，后逐漸下降;A549、H1975移植瘤放射性攝取明顯低于HCC827，且不同時間點T/N值無顯著性差異。
　　(9)4種人非小細胞肺癌移植瘤的

11、EGFR、pEGFR表達結果顯示:各組細胞移植瘤EGFR表達率無明顯差異。不同細胞移植瘤pEGFR表達不同，HCC827移植瘤pEGFR表達率和表達水平均最高，明顯高于PC9、A549和H1975移植瘤。PC9移植瘤pEGFR表達率、表達水平高于A549和H1975移植瘤，A549和H1975移植瘤之間無顯著性差異。
　　(10)4種人非小細胞肺癌移植瘤PET-CT顯像T/N值與pEGFR表達評分的相關性分析，結果顯示:HCC82

12、7、PC9移植瘤T/N值與pEGFR表達評分呈正相關(HCC827:r=0.974，PC9:r=0.960)，A549、H1975移植瘤T/N值與pEGFR表達評分相關性較低（A549:r=:0.216，H1975:r=0.558）。
　　結論:
　　(1)改進的11C-PD153035合成路徑成熟，放射化學純度高，標記率適宜，為較理想的表皮生長因子受體PET顯像劑。體內(nèi)分布實驗證實11C-PD153035適于肺、腦腫瘤的P

13、ET顯像。
　　(2)EGFR-TKI敏感程度不同的人非小細胞肺癌細胞對11C-PD153035放射性攝取水平具有按EGFR-TKI敏感程度由高向低依次減低的趨勢。4種細胞系pEGFR表達水平依EGFR-TKI敏感程度減低而減低。11C-PD153035放射性攝取與細胞pEGFR表達水平呈正相關。
　　(3)11C-PD153035放射性攝取的體外阻斷實驗顯示:HCC827、PC9和A549細胞隨厄洛替尼濃度增大，pEGFR

14、表達程度減低;HCC827和PC9細胞的11C-PD153035放射性攝取值亦隨厄洛替尼濃度增大而減低。HCC827和PC9細胞的放射性攝取值與pEGFR表達水平呈正相關。
　　(4)4種人非小細胞肺癌移植瘤PET-CT顯像實驗顯示EGFR-TKI高敏感性細胞HCC827和PC9移植瘤11C-PD153035放射性攝取較高，EGFR-TKI中度敏感細胞A549和抵抗細胞H1975移植瘤放射性攝取明顯低于HCC827移植瘤。