急性肝衰竭大鼠模型腸道防御素-5、分泌型磷脂酶A2和溶菌酶表達(dá)變化及與細(xì)菌移位的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　探討急性肝衰竭(ALF)大鼠模型腸道防御素-5(RD-5)、分泌型磷脂酶 A2(sPLA2)和溶菌酶(Lysozyme)表達(dá)變化及與細(xì)菌移位的關(guān)系。
　　方法:
　　清潔級常規(guī)喂養(yǎng)雄性SD大鼠,1周后隨機分為正常對照組和ALF模型組。正常對照組8只,腹腔注射0.9％氯化鈉溶液1.2ml/100g;ALF模型組40只,按造模后不同觀察時間點分為8、16、24、48、72小時5個時間亞組,每組8只,一次性腹腔注

2、射10%D-氨基半乳糖1.2ml/100g。于各相應(yīng)時間點處死大鼠,進行以下指標(biāo)檢測:①取各組肝、脾和腸系膜淋巴結(jié)組織勻漿進行細(xì)菌培養(yǎng);②檢測血清ALT、AST、Tbil、Alb水平;③肝組織和末段回腸組織經(jīng)HE染色后光鏡下觀察病理變化;④RT-PCR法檢測各組末段回腸 RD-5、sPLA2、Lysozyme mRNA表達(dá);⑤Western blot和免疫組化法檢測sPLA2和Lysozyme蛋白表達(dá)。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析。<

3、br>　　結(jié)果:
　　1、急性肝衰竭模型組ALT、AST逐漸升高,于48h達(dá)到高峰,并出現(xiàn)總膽紅素明顯升高,隨后轉(zhuǎn)氨酶下降,總膽紅素繼續(xù)上升。模型組72h肝臟組織正常結(jié)構(gòu)消失,呈大片融合壞死,超過整個切片面積的2/3,殘留少量肝細(xì)胞,匯管區(qū)及壞死區(qū)可見大量炎性細(xì)胞浸潤,肝竇充血、出血明顯,符合急性肝衰竭病理改變,成功誘導(dǎo)急性肝衰竭模型。
　　2、正常對照組未出現(xiàn)臟器細(xì)菌培養(yǎng)陽性,模型組24h、48h和72h臟器細(xì)菌移位率分別

4、為8.3%、37.5%和58.3%,但是,72h大鼠模型的末端回腸結(jié)構(gòu)尚完整,未見粘膜上皮細(xì)胞明顯脫落壞死情況。
　　3、模型組大鼠回腸RD-5、sPLA2mRNA在早期逐漸升高,16h上升至高峰(1.291±0.153、1.131±0.128),與對照組(0.725±0.116、0.722±0.112)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=69.25、95.71,均P=0.000),隨后逐漸下降,72h(0.415±0.104、0.425±

5、0.076)明顯低于對照組(t=31.55、44.98,均P=0.000);對照組Lysozyme mRNA為0.853±0.093,模型組早期亦升高,8h上升至高峰(1.211±0.107),最后下降,72h(0.704±0.103),明顯低于對照組(t=9.224;p=0.009)。Western blot法檢測sPLA2和Lysozyme蛋白表達(dá),對照組分別為0.583±0.121和0.650±0.093,模型組72h分別為0.3

6、27±0.086和0.382±0.057,均明顯低于對照組(t=12.28、15.83,p=0.004、0.001)。sPLA2蛋白在對照組回腸潘氏細(xì)胞內(nèi)呈粗顆粒棕色信號,而在模型組72h時僅可見少量點狀棕色信號分布;Lysozyme蛋白在對照組回腸所有潘氏細(xì)胞中呈粗顆粒強信號,而在模型組72h時在部分潘氏細(xì)胞中呈散在點狀信號。
　　結(jié)論:
　　急性肝衰竭大鼠模型的回腸粘膜免疫屏障功能下降,隨著潘氏細(xì)胞RD-5、 sPLA2