廿烷五烯酸協(xié)同順鉑對人肺癌A-549細(xì)胞株的影響.pdf

1、目的：在體外實驗中，觀察廿烷五烯酸對人肺癌 A-549細(xì)胞株的抗增殖和誘導(dǎo)凋亡作用及其與順鉑聯(lián)用的協(xié)同效應(yīng)，為其成為防治腫瘤的藥物提供實驗依據(jù)。
　　方法：選用人肺癌 A-549細(xì)胞株進(jìn)行體外培養(yǎng)，用 MTT比色法測定廿烷五烯酸對人肺癌 A-549細(xì)胞株的抗增殖作用。應(yīng)用倒置顯微鏡、HE染色光學(xué)顯微鏡、AO/EB雙染色熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化。通過 TUNEL和 AO/EB雙染色法檢測細(xì)胞凋亡率。應(yīng)用 FCM進(jìn)行定量并作細(xì)

2、胞周期分析。
　　結(jié)果：
　?、費TT實驗結(jié)果表明：廿烷五烯酸在15μg/ml～60μg/ml范圍內(nèi)，于24、48、72、96小時對肺癌 A-549細(xì)胞株均有抑制生長作用及協(xié)同順鉑的抗癌作用，并表現(xiàn)出濃度、時間依賴性關(guān)系。
　?、贖E染色：光鏡下，實驗組 A-549腫瘤細(xì)胞體積變小、變圓，核染色質(zhì)濃縮或染色質(zhì)塊形成，有的細(xì)胞核脫落，有的細(xì)胞膜起泡形成凋亡小體。倒置顯微鏡下，實驗組 A-549腫瘤細(xì)胞體積變小、變圓，核染

3、色質(zhì)凝集，細(xì)胞間連接疏松，貼壁能力減弱。AO/EB雙染色熒光顯微鏡下，實驗組 A-549腫瘤細(xì)胞核染色質(zhì)呈橘紅色，胞質(zhì)內(nèi)的橘紅色或橘黃色熒光消失，細(xì)胞周圍可見亮綠色熒光的凋亡小體。
　?、跘O/EB雙染色：細(xì)胞凋亡半定量方法結(jié)果，60μg/ml的EPA作用 A-549肺癌細(xì)胞12、24、48、72、96小時,凋亡率分別為3.4％、9%、23%、13%、6%，不同時間段相比有統(tǒng)計學(xué)差異。TUNEL染色法結(jié)果，當(dāng) EPA濃度15μg/

4、ml、30μg/ml、60μg/ml時，細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）依次升高，分別為5.57±0.82%、11.68±1.26%、24.53±1.68%，不同濃度之間相比有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　④FCM檢測：對照組細(xì)胞培養(yǎng)48h，凋亡率僅0.16%，未見亞二倍體峰；當(dāng)15μg/ml、30μg/ml、60μg/ml的EPA處理48小時時，細(xì)胞出現(xiàn)了凋亡峰，凋亡率分別為10.50%、19.87%、30.12%，不同濃度之間相比有統(tǒng)計學(xué)差異，EPA

5、終濃度在15μg/ml～60μg/ml時，G0/G1期和 G2/M期細(xì)胞百分比下降，S期細(xì)胞百分比上升，阻滯周期于 S期。
　　結(jié)論：
　　1．體外實驗中，廿烷五烯酸對人肺癌 A-549細(xì)胞生長有抑制作用，呈明顯的量效和時效關(guān)系。
　　2．廿烷五烯酸與順鉑有協(xié)同作用，呈明顯的量效和時效關(guān)系。
　　3．經(jīng)凋亡形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)及流式細(xì)胞儀結(jié)果分析，廿烷五烯酸作用于人肺癌 A-549細(xì)胞株后均出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的凋亡改變。<