尋常性天皰瘡抗原表位的精細(xì)定位.pdf

1、尋常性天皰瘡(pemphigus vulgaris,PV)是一危及生命的自身免疫性大皰性皮膚與粘膜疾病,是所有類(lèi)型天皰瘡中發(fā)病率和死亡率均最高的一種.其臨床特點(diǎn)為皮膚和粘膜出現(xiàn)松弛的水皰和糜爛面,病理上主要表現(xiàn)為棘層松解和表皮內(nèi)水皰[1].課題組曾通過(guò)大腸桿菌表達(dá)了EC1-2和谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST)的融合蛋白,并以此融合蛋白免疫兔,再將兔抗血清被動(dòng)轉(zhuǎn)移至Balb/c新生鼠,誘導(dǎo)出PV的病理改變,證明EC1-2包含有致病性表位<'[6]

2、>.EC1-2是一個(gè)含有200多個(gè)氨基酸的大片段,而抗原抗體間的相互識(shí)別往往只在于幾個(gè)重要的氨基酸.為了精細(xì)定位自身抗體在EC1-2上的識(shí)別位點(diǎn),進(jìn)一步了解PV抗原及其抗體,認(rèn)識(shí)PV的發(fā)病機(jī)理,為下一步通過(guò)制備抗原多肽治療PV奠定基礎(chǔ),該試驗(yàn)在我科重組PV抗原EC1-2的基礎(chǔ)上,從PV患者血清中純化出與EC1-2特異結(jié)合的自身抗體,以此純化的自身抗體為配基分別對(duì)一個(gè)線性噬菌體展示九肽庫(kù)和一個(gè)環(huán)狀噬菌體展示九肽庫(kù)進(jìn)行親合篩選,富集出一群與

3、自身抗體結(jié)合的噬菌體克隆.用ELISA驗(yàn)證每個(gè)單克隆與PV患者的血清和正常人血清的結(jié)合情況,挑選出與PV患者血清結(jié)合強(qiáng)而與正常人血清結(jié)合弱的噬菌體克隆,并進(jìn)一步通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性ELISA來(lái)驗(yàn)證這些克隆是否可與EC1-2競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合PV患者血清,結(jié)果得到7個(gè)可與EC1-2競(jìng)爭(zhēng)的噬菌體克隆,這些噬菌體克隆在功能上可做為Dsg3表位的模擬物,然后通過(guò)計(jì)算機(jī)軟件(DNA STAR)將這7個(gè)模擬表位與已知EC1-2序列比對(duì),據(jù)氨基酸同源性定位出可能的表位位