2型糖尿病大鼠血清sICAM-1的動(dòng)態(tài)變化及與紅細(xì)胞聚集性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：近年來，2型糖尿病的發(fā)病率日益增加，而影響病人預(yù)后的主要因素在于其慢性并發(fā)癥出現(xiàn)的早晚及其嚴(yán)重程度，隨著研究的不斷深入，粘附分子在其過程中的作用越來越為人們所重視。研究證明糖尿病微血管病變中血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1上調(diào)，介導(dǎo)白細(xì)胞聚集粘附血管內(nèi)皮細(xì)胞，誘導(dǎo)一系列免疫炎癥反應(yīng)，阻塞微血管；在大血管并發(fā)癥方面主要是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生進(jìn)而引起心腦血管疾病的發(fā)生發(fā)展。可溶性細(xì)胞間粘附分子-1(sICAM-1)存在于人的血清中，與炎

2、癥反應(yīng)呈正相關(guān)，其主要來源于ICAM-1通過細(xì)胞膜脫落或細(xì)胞壞死裂解的方式，也可能是ICAM-1mRNA的不同剪接形式的不同表達(dá)蛋白直接進(jìn)入血液形成的可溶形式，可間接反映ICAM-1水平，測定簡單易行，具有較高的臨床價(jià)值。存在于糖尿病人體內(nèi)的另一個(gè)特點(diǎn)是紅細(xì)胞聚集、微循環(huán)障礙引起的一系列病理改變。那么，sICAM-1與紅細(xì)胞聚集之間有沒有一定關(guān)聯(lián)呢?目前為止還未有報(bào)道。本研究是首先制備2型糖尿病大鼠模型，通過檢測其成摸后0、4、8、12

3、、16周sICAM-1的濃度，觀察其動(dòng)態(tài)變化；同時(shí)段檢測空腹血糖、血液流變學(xué)各指標(biāo)(主要是紅細(xì)胞聚集指數(shù)和低切變率下全血粘度)，以了解糖尿病大鼠隨病情進(jìn)展sICAM-1的變化趨勢，探討其與紅細(xì)胞聚集性的關(guān)系，為臨床早期發(fā)現(xiàn)、治療并發(fā)癥提供客觀依據(jù)。 方法：健康7周齡清潔級近交系Wistar大鼠120只(河北醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重180-220g，雌雄各半，隨機(jī)分為兩組：正常組(controlgroup，CON)50只，

4、雌雄各半，作為對照；實(shí)驗(yàn)組(trialgroup，TRI)70只，雌雄各半。正常組動(dòng)物喂養(yǎng)普通飼料：蛋白質(zhì)占23％，碳水化合物占50％，脂肪占5％；實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物喂養(yǎng)高脂飼料：在10000g普通飼料中加入150g食鹽、50g白糖、2000g豬油、400g麻油、2000g花生、900g雞蛋，其碳水化合物48％，脂肪22％，蛋白質(zhì)20％。2月后實(shí)驗(yàn)組大鼠腹腔注射30mg/kg鏈脲佐菌素(STZ)(以PH4.4的0.1mol/1檸檬酸鈉緩沖液配制

5、成1％濃度)，正常組大鼠腹腔注射同等量的檸檬酸鈉緩沖液。一周后給所有動(dòng)物做口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(大鼠禁食12h后尾靜脈取血測空腹血糖，然后按2g/kg體重灌胃50％葡萄糖溶液，2h后尾靜脈取血測2h血糖)，空腹血糖≥7.0mmol/l，糖負(fù)荷后2小時(shí)血糖≥11.1mmol/l者為造模成功。從造模成功者中選取血糖較高的大鼠50只(雌雄各半)納入正式試驗(yàn)，做為糖尿病組(diabetesgroup，DIA)。采用隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)將正常組和糖尿病組

6、各分為0周、4周、8周、12周、16周5組，每組10只，雌雄各半，分別于以上時(shí)段空腹取血測定觀測值。正常組一直喂普通飼料，糖尿病組繼續(xù)喂高脂飼料，以防血糖回落，每2周測體重和空腹血糖(均為禁食10-12小時(shí)，尾靜脈取血)，空腹血糖＜7.0mmol/l為剔除條件。 于試驗(yàn)第0、4、8、12、16周禁食10-12小時(shí)，1％水合氯醛腹腔注射麻醉，開腹下腔靜脈取血7ml，5ml放入肝素抗凝管交專人立即測血液流變學(xué)各指標(biāo)，主要是紅細(xì)胞聚集

7、指數(shù)和低切變率下全血粘度值；2ml室溫下自然凝固，1500轉(zhuǎn)/分離心10分鐘后，分離血清，置于-80℃超低溫冰箱保存，待標(biāo)本收集完全后同批采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定sICAM-1濃度。 所用數(shù)據(jù)輸入SAS統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析和q檢驗(yàn)，兩者之間相關(guān)性關(guān)系采用直線相關(guān)分析。P＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)有顯著性差異。 結(jié)果： 1實(shí)驗(yàn)過程中，

8、無一例動(dòng)物死亡，成模前正常組大鼠體重穩(wěn)定增長，血糖值均正常((4.68±0.66)mmol/l)；實(shí)驗(yàn)組大鼠體重增加較正常組快，成模前血糖亦在正常范圍((4.33±0.34)mmol/l)。 2正式實(shí)驗(yàn)后正常組大鼠隨年齡增長，血糖值穩(wěn)定，均在正常范圍，各時(shí)間段之間無明顯差別(P＞0.05)，體重穩(wěn)定增加，紅細(xì)胞聚集指數(shù)、低切變率下全血粘度及細(xì)胞間粘附分子-1濃度均無明顯變化(見附表1)。糖尿病組大鼠隨著病程的進(jìn)展，各階段血糖值一

9、直處于高值，無明顯增長或降低，各時(shí)間段之間無明顯差別(P＞0.05)；糖尿病鼠成模后體重增加緩慢甚至降低，但與正常組同時(shí)段比無明顯差異(見附表2)。 3糖尿病組大鼠成模0周時(shí)紅細(xì)胞聚集指數(shù)與正常組比較無明顯差別(t=0.44,P=0.66＞0.05)，sICAM-1濃度與正常組比較亦無明顯差別(t=0.55,P=0.59＞0.05)，全血低切粘度與正常組無明顯差別，1.0(1/s)值(t=0.72,P=0.48＞0.05)，10

10、(1/s)值(t=0.06,P=0.95＞0.05)。 4隨糖尿病病程進(jìn)展，糖尿病大鼠紅細(xì)胞聚集指數(shù)、低切變率下全血粘度值逐漸增加，成模0周與4周無明顯差別，8周、12周、16周與最初兩周差別明顯，P值＜0.01；后三時(shí)段與同時(shí)段正常組相比明顯增加(見附表2)。 5隨糖尿病病情進(jìn)展，糖尿病大鼠血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1濃度逐漸增高，各時(shí)間段相比隨病程延長濃度逐漸增高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，與同時(shí)段正常組相比均

11、有顯著差異(見附表2)。 6血清sICAM-1與紅細(xì)胞聚集指數(shù)、全血1.0(1/s)粘度值、10(1/s)粘度值均呈正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為(r=0.9189，0.9165，0.9022)，P值均＜0.01。 結(jié)論：本研究結(jié)果顯示2型糖尿病大鼠血清可溶性細(xì)胞間粘附分子-1(sICAM-1)的濃度隨著病程的進(jìn)展逐漸增加，且與紅細(xì)胞聚集性密切相關(guān)。sICAM-1濃度的增加可能是由于高血糖引起增高的糖基化終產(chǎn)物(AGEs)刺