VEGF、CD31在慢性實驗性糖尿病大鼠及非糖尿病大鼠局灶性腦缺血再灌注模型中的表達(dá).pdf

1、目的：1、建立慢性實驗性糖尿病大鼠(CEDR)和非糖尿病大鼠(NDR)局灶性腦缺血再灌注(CI/R)模型，并分析比較影響模型制備成功的因素。2、觀測VEGF、CD31在CEDR及NDR局灶性CI/R模型中的表達(dá)，并分析在相同CI/R損傷情況下，VEGF、CD31在兩類大鼠表達(dá)不同的原因。 方法： 1.慢性實驗性糖尿病大鼠模型的制備：140只體質(zhì)量為180～220g的雄性Wister大鼠禁食12小時后，于腹腔內(nèi)一次性注射鏈

2、脲佐菌素(STZ)55mg/kg，普通飲食飼養(yǎng)42～47天，在飼養(yǎng)過程中每7天飲水中給予2次慶大霉素(6.4×104U/只)。注射鏈脲佐菌素后每周斷尾取血測定1次血糖值及體質(zhì)量，及時淘汰不成模大鼠。并將成模后體質(zhì)量為240～310g、血糖水平在13.5～25.6mmol/L的糖尿病大鼠(diabeticrat,DR)進(jìn)一步制作CI/R模型。 2.腦缺血再灌注模型的制備：將成模的體質(zhì)量為240～310g的CEDR和NDR各90只，

3、按照體重、血糖值分別隨機(jī)分為空白對照組、假手術(shù)組、腦缺血再灌注1h、3h、6h、12h、24h、72h、168h各9組，每組大鼠10只。采用Longa線栓法分別制作各組DR、NDR局灶性CI/R模型，并用Longa神經(jīng)功能評分標(biāo)準(zhǔn)，比較兩類大鼠模型制備成功率，分析兩類大鼠模型制備失敗及死亡原因。 3.VEGF、CD31表達(dá)的測定：DR和NDR各9組分別制作CI/R模型后，分別斷頭取腦，用組織切片機(jī)自前腦額極起切取6片冠狀切片，層

4、厚2mm,取第4片腦切片置于10％甲醛固定液中固定，石蠟切片，采用免疫組化的方法染色，在OLYMPUS光學(xué)顯微鏡下分別觀察DR和NDR空白對照組、假手術(shù)組、腦缺血再灌注后1h、6h、12h、48h、72h、168h時VEGF、CD31在缺血中心區(qū)、缺血半暗帶區(qū)表達(dá)的情況。每張切片隨意取5個視野，測定每個視野內(nèi)陽性反應(yīng)細(xì)胞數(shù)。 結(jié)論： 1.在制備慢性實驗性糖尿病大鼠局灶性CI/R模型過程時，初始大鼠體重控制在180～220

5、g較為合適，在糖尿病病程第35天時，測量大鼠血糖、體質(zhì)量：把血糖明顯升高(＞13.5mmol/L并＜25.6mmol/L)且體質(zhì)量在220g～300g者，定為消瘦鼠，表明糖尿病模型制備成功，并可進(jìn)一步制備糖尿病大鼠CI/R模型。 2.在相同腦缺血再灌注條件下，DR腦組織損傷較NDR重，表現(xiàn)為DR：神經(jīng)功能缺損癥狀重、神經(jīng)功能評分高于NDR腦缺血再灌注組、腦梗死體積大。 3.腦缺血再灌注后DR再灌注后各時間點VEGF缺血中