人參果中非皂苷類活性物質(zhì)的研究.pdf

1、本實驗以深入開發(fā)利用人參果，研發(fā)具有增強(qiáng)免疫力、促進(jìn)微循環(huán)、抗衰老、抗糖尿病、提高記憶力的藥物為目的，對人參果中的非皂苷類活性物質(zhì)AF、AFG、L-焦谷氨酸的提取、分離、鑒定和定量等方面進(jìn)行系統(tǒng)的研究。 首次，從人參果中提取分離得到了AF、AFG。在前人基礎(chǔ)上建立了新的分離體系。樣品粉末用五倍量乙醇攪拌提取24小時，抽濾，棄去濾液，殘渣加入10倍量雙重蒸餾水，攪拌提取12小時，離心，取上清液，殘渣繼續(xù)加入雙重蒸餾水，重復(fù)3次。合

2、并三次提取后的離心上清液，減壓濃縮至小體積，濃縮液過大孔樹脂NKA柱層析，雙重蒸餾水洗脫，收集水洗脫液凍干成粉末，置于冰箱中備用。3.0g凍干粉末溶于6mL雙重蒸餾水中，過SephadexLH-20柱，雙重蒸餾水洗脫(42mL/h)，收集含AFG和AF的部分，溶于0.2﹪冰醋酸水溶液中，使成為200mg/mL溶液，過Bio-gelP-2柱，以0.2﹪醋酸水洗脫，洗脫流速為18mL/h，收集含AF和AFG部分，過硅膠低壓干柱，以正丁醇:冰

3、醋酸:水(2:1:1)洗脫，即得AF、AFG。 采用反復(fù)聚丙烯酰胺(Bio-gel)柱層析從合成物中分離精氨酸衍生物AF、AFG，作為從人參果中分離AF、AFG的標(biāo)準(zhǔn)品。通過反復(fù)實驗證實，已純化的標(biāo)準(zhǔn)品隨貯藏時間的延長和貯藏溫度的升高，含量逐漸降低。因此，標(biāo)準(zhǔn)品貯藏于-40℃、干燥的環(huán)境為最佳。在減壓濃縮的過程中，也必須嚴(yán)格控制溫度低于45℃，否則發(fā)生轉(zhuǎn)化。 采用薄層掃描法測定人參花和人參果中AF含量。具體條件如下：以正

4、丁醇:冰醋酸:水(2:1:1)為展開劑，以0.2﹪茚三酮乙醇溶液為顯色劑，AF的測定波長λs=510nm，參比波長λR=685nm。結(jié)果表明AF在1.00-3.50μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2=0.999；平均回收率為99.77﹪(n=6)，RSD=1.34﹪。此方法簡便，可靠，可用于人參花和人參果中的AF的含量分析。 首次從人參果中發(fā)現(xiàn)了L-焦谷氨酸，并采用大孔吸附樹脂層析，SephadexLH-20柱層析，硅膠柱層析

5、對該成分進(jìn)行了提取分離。具體的提取分離條件如下：取人參果凍干粉末加10倍量蒸餾水超聲提取3次，每次12h，合并提取液，離心(8000rpm30min)，收集上清液濃縮至一定體積(1000mL)，過大孔樹脂NKA柱，用蒸餾水和20﹪乙醇洗脫，分別收集洗脫液。將水洗脫部分和20﹪乙醇洗脫部分分別上SephadexLH-20葡聚糖凝膠柱，均以水洗脫，部分收集器收集(42mL/h)，薄層層析硅膠G板檢測洗脫組分，分別收集每個層析柱水洗脫的含有與

6、L-焦谷氨酸同一Rf值的部分。將收集到的樣品濃縮至干，加少量的甲醇溶解，用適量的粗硅膠拌勻，揮干溶劑，采用低壓硅膠干柱分離，用洗脫劑n-BuOH:AcOH:H2O(6:2:2)洗脫至柱底，然后分段切出硅膠，揮干溶劑后，以水洗脫，然后用薄層層析檢查，合并相同組分，再進(jìn)行一次低壓硅膠干柱層析，即得較純的L-焦谷氨酸，純度高達(dá)96.35﹪。 應(yīng)用RP-HPLC法對人參地上各個部位中的L-焦谷氨酸進(jìn)行了定量分析。具體條件如下：色譜柱：N

7、ucleosilC18.(5μm,150mm×4.6mmID)；流動相：MeOH:0.005NKAc水溶液(8:92)，溶劑系統(tǒng)流速為0.4mL/min紫外檢測波長為210nm；柱溫25℃；L-焦谷氨酸的保留時間為5.427min；經(jīng)統(tǒng)計學(xué)計算其回歸方程為Y=68498.7857X-183.36071，r=0.99915，L-焦谷氨酸在0.05-3.50mg/mL范圍內(nèi)濃度與色譜峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.76﹪，RSD=

8、1.67﹪。通過方法學(xué)考察，表明該法簡便、靈敏、準(zhǔn)確，可作為測定人參地上各個部位中的L-焦谷氨酸含量的有效方法。測定結(jié)果表明：人參地上各個部位中L-焦谷氨酸含量不盡相同，其含量由高到低依次為人參果＞人參花＞人參莖葉。 本文的創(chuàng)新點如下： 采用不同的提取、分離工藝路線，首次從人參果中發(fā)現(xiàn)并分離得到了3個單體化合物。通過物理常數(shù)、化學(xué)方法和波譜分析(13CNMR、1HNMR、UV、MS)方法進(jìn)行了鑒定。 首次從人參花