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文檔簡(jiǎn)介
1、背景
腦血管疾病因?yàn)檩^高的發(fā)病率和致殘致死率給社會(huì)、家庭及個(gè)人造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和精神負(fù)擔(dān),影響人們的生活質(zhì)量,嚴(yán)重危害到人類的生命和健康[1]。因此,尋找有效地治療、預(yù)防腦血管疾病和最大程度地降低缺血性腦損傷的藥物及方法成為醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)方向。
而目前針對(duì)缺血性的腦血管疾病尚無(wú)有效的治療方法。臨床上采用早期的溶栓治療,同時(shí)會(huì)引起更為嚴(yán)重的腦缺血再灌注損傷[2]。研究發(fā)現(xiàn),部分患者的血管在腦缺血后能夠經(jīng)溶栓治療后恢
2、復(fù)再通或自然再通,但是在恢復(fù)血供后,可導(dǎo)致恢復(fù)血流供應(yīng)的腦組織在某一些情況下產(chǎn)生損傷和神經(jīng)功能障礙加重,即腦缺血再灌注損傷[3]。其中研究證實(shí)血腦屏障通透性發(fā)生改變可導(dǎo)致腦組織出血和水腫等繼發(fā)性損傷。相關(guān)的研究表明:血腦屏障完整性在腦缺血再灌注損傷的過(guò)程中的有重要的作用[4]。
血腦屏障由血-腦及血-腦脊液屏障組成,是腦毛細(xì)血管特有的特征性結(jié)構(gòu),維持機(jī)體中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,其結(jié)構(gòu)的改變對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)有重要的影響。在正常情況下,
3、血腦屏障可以有效的保護(hù)腦組織免受許多化學(xué)物質(zhì)和細(xì)菌的侵害。在缺血性腦損傷后,血腦屏障的通透性增加,一些藥物、病毒、中性粒細(xì)胞和小吞噬細(xì)胞就可以通過(guò)血腦屏障[5]。血管基底膜由細(xì)胞外基質(zhì)分子組成,對(duì)維持血腦屏障的完整性起重要作用,而細(xì)胞外基質(zhì)分子是基質(zhì)金屬蛋白酶的主要作用底物。國(guó)內(nèi)外研究顯示,基質(zhì)金屬蛋白酶-2和基質(zhì)金屬蛋白酶-9可降解細(xì)胞外基質(zhì)、破壞血腦屏障[6]。
消退素(resolvins,Rvs)是一類由ω-3不飽和脂肪
4、酸包括二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)衍生來(lái)的具有抗炎、促炎癥消退作用的內(nèi)源性脂質(zhì)介質(zhì)[7]。研究表明,DHA靜脈注射或富含DHA、EPA飲食能減輕成年大鼠和新生大鼠低氧/缺血誘發(fā)的神經(jīng)功能損傷[8]。有研究發(fā)現(xiàn)ω-3不飽和脂肪酸可以增加腦缺血后的血管生成,提供長(zhǎng)期的腦保護(hù)[9]。消退素D1(resolvinD1,RvD1)是由DHA內(nèi)生轉(zhuǎn)化而來(lái)。已有許多研究發(fā)現(xiàn)RvD1對(duì)肝、腎、肺等器官的缺血再灌注損傷有保護(hù)作用[10
5、][11][12]。而目前對(duì)腦缺血再灌注損傷的影響,國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)報(bào)道。
本試驗(yàn)采用大鼠腦缺血再灌注損傷模型。觀察消退素D1對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的影響,以及血腦屏障的通透性的變化,并探討可能的機(jī)制。
材料和方法
分組
選擇清潔級(jí)健康SpragueDawley雄性成年大鼠(體重260-280g)100只,用完全隨機(jī)數(shù)字表法將其分成五組:1.假手術(shù)組+溶劑組:Sham組(5ul);2.腦缺血再灌
6、注+溶劑組:I/R組(5ul),3.腦缺血再灌注+RvD1小劑量治療組:RvD1(S)組(小劑量0.03nM,5ul);4.腦缺血再灌注+RvD1中劑量治療組:RvD1(M)組(小劑量0.1nM,5ul);5.腦缺血再灌注+RvD1大劑量治療組:RvD1(L)組(小劑量0.3nM,5ul)。
方法
1.通過(guò)改良線栓法,使大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈短暫栓塞,制作局灶性腦缺血再灌注損傷模型(MCAO模型)。使用10%水合氯醛(3
7、50mg/kg)給予大鼠腹腔注射麻醉,從頸總動(dòng)脈經(jīng)頸內(nèi)動(dòng)脈置入線栓,并在2h后將線栓拔出,形成腦缺血再灌注。在腦缺血再灌注24h后,進(jìn)行大鼠神經(jīng)功能損傷評(píng)分;
2.氯化三苯四氮唑(TTC)染色法檢測(cè)大鼠腦梗死體積的變化;
3.干濕比法測(cè)定腦組織的含水量;
4.通過(guò)紫外分光光度計(jì)法檢測(cè)大鼠腦組織中伊文斯藍(lán)(evansblue,EB)的含量,檢測(cè)血腦屏障(blood-brain-barrier,BBB)的完整性
8、;
5.用WesternBlot法檢測(cè)基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表達(dá);
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
采用SPSS17.0軟件對(duì)本實(shí)驗(yàn)的所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)的處理分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示。多組間比較采用one-wayANOVA進(jìn)行單因素方差分析,組間的兩兩比
9、較采用LSD法進(jìn)行最小顯著差檢驗(yàn)。α=0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
結(jié)果
1.實(shí)驗(yàn)組所有大鼠均在麻醉后2h清醒。缺血再灌注24h時(shí),Sham組大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分為0,I/R組和RvD1組的大鼠在麻醉清醒后均有不同程度的神經(jīng)功能缺損癥狀。腦缺血再灌注24h,與I/R組(2.13±0.78)相比,RvD1(S)組(1.88±0.73)大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分未明顯降低(P>0.05),RvD1(M)組(1.25±0.44)和
10、RvD1(L)組(1.67±0.76)神經(jīng)功能缺損評(píng)分降低(P<0.05);與RvD1(L)相比,RvD1(M)組神經(jīng)功能缺損評(píng)分降低(P<0.05)。
2.經(jīng)過(guò)氯化三苯四氮唑(TTC)染色,正常腦組織為紅色,梗死腦組織為蒼白色。Sham組腦組織梗死體積為0;與I/R組(31.44±3.39)%相比,RvD1(M)組(15.27±3.25)%和RvD1(L)組(18.73±3.87)%腦梗死體積降低(P<0.05);與RvD1
11、(L)組比較,RvD1(M)組腦梗死體積降低(P<0.05)。
3.Sham組大鼠腦組織含水量為(76.45±1.03)%,與Sham組比較,I/R組(84.29±0.96)%和RvD1(M)組(78.21±0.87)%、RvD1(L)組(80.73±0.64)腦組織含水量均升高.(P<0.05);與I/R組比較,RvD1(M)組和RvD1(L)組腦組織含水量降低(P<0.05),與RvD1(L)組比較,RvD1(M)組腦水含
12、量降低(P<0.05)腦水腫程度增強(qiáng)。
4.Sham組大鼠腦組織呈乳白色,I/R組的大鼠缺血側(cè)部分腦組織呈藍(lán)色,RvD1組與I/R組比較缺血側(cè)腦組織的藍(lán)色程度明顯減輕。熒光光度計(jì)定量測(cè)定大鼠腦組織中的EB含量顯示:Sham組(736±129)ng/g,I/R組(3460±605)ng/g、RvD1(S)組(2949±534)ng/g、RvD1(M)組(1637±463)ng/g、RvD1(L)組(1929±581)ng/g;與
13、I/R組相比,RvD1(M)組、RvD1(L)組腦組織中EB的含量減少(P<0.05);與RvD1(L)組相比,RvD1(M)組腦組織中EB的含量減少(P<0.05)。
5.Sham組MMP-2和MMP-9蛋白含量較低;I/R組和RvD1組MMP-2和MMP-9蛋白含量均升高(P<0.05);與I/R組比較,RvD1(M)組、RvD1(L)組MMP-2和MMP-9蛋白含量降低(P<0.05);與RvD1(L)組比較,RvD1(
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