Bmi-1和端粒酶在食管鱗癌中表達(dá)與細(xì)胞凋亡的關(guān)系.pdf

1、背景與目的：
　　 腫瘤的致病因素眾多，但追根溯源是基因及細(xì)胞相關(guān)代謝酶發(fā)生了改變。食管癌是腫瘤的一種類型，也是經(jīng)過多階段的演進(jìn)過程，多基因改變和參與，以及相關(guān)代謝酶的基因改變和(或)DNA錯(cuò)配修復(fù)酶的異常改變。原癌基因Bmi-1(Blymphoma Mo MLV insertion region，Bmi-1)是多梳基因(Polycomb groupgenes)家族中重要的調(diào)節(jié)基因，多梳基因由多種轉(zhuǎn)錄抑制子組成，轉(zhuǎn)錄抑制子與細(xì)胞

2、周期和增殖有關(guān)，因此，PcG是一類重要的與發(fā)育相關(guān)的基因。原癌基因Bmi-1又是PcG基因家族的核心成員之一，其最初發(fā)現(xiàn)與另一種癌基因c-myc協(xié)同作用促使細(xì)胞轉(zhuǎn)化和腫瘤的形成。近年來研究發(fā)現(xiàn)Bmi-1作為一種廣泛表達(dá)核蛋白跟腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲、預(yù)后等病理指標(biāo)相關(guān)性很高。
　　 端粒是染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，它是由許多簡單短重復(fù)序列和端粒結(jié)合蛋白(telomere end-binding protein，TEBP)組成。在正

3、常人體細(xì)胞中，可隨著細(xì)胞分裂而逐漸縮短。端粒是細(xì)胞必需的遺傳組分，因?yàn)樗軌虮Ｗo(hù)和補(bǔ)償染色體末端遺傳信息的丟失，保護(hù)它不會(huì)被核酸酶識(shí)別而免遭降解。端粒的存在是為了維持染色體的穩(wěn)定。沒有端粒，末端將暴露，易被外切酶水解。端粒不是用DNA聚合酶來合成的，是用端粒酶來合成的。端粒酶是合成端粒DNA的特殊逆轉(zhuǎn)錄酶，具有RNA依賴性和DNA多聚酶性質(zhì)的核糖體蛋白復(fù)合體，能以自身RNA為模板，不斷合成端粒酶DNA序列，保持染色體端粒的完整性。正常體

4、細(xì)胞每分裂一次，端粒的長度就會(huì)縮短，最終縮短到一定的長度后細(xì)胞衰老。當(dāng)端粒酶存在且被激活的狀態(tài)下，端粒酶作用于端粒，使端粒的長度不在縮短，因而細(xì)胞發(fā)生永生化。尤其是在惡性、晚期腫瘤中，端粒酶活性增強(qiáng)，使大量的癌細(xì)胞無休止的增殖，導(dǎo)致細(xì)胞的惡化轉(zhuǎn)移。目前大量研究發(fā)現(xiàn)，端粒酶的激活是促進(jìn)腫瘤發(fā)生、增殖及轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要因素，端粒酶的表達(dá)水平跟惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。
　　 在大多惡性腫瘤中，Bmi-1在腫瘤的發(fā)生

5、發(fā)展中起到了顯著的作用，過度表達(dá)Bmi-1可以激活端粒逆轉(zhuǎn)錄酶的轉(zhuǎn)錄，從而提高了端粒酶的活性，而端粒酶是目前研究已趨成熟的一個(gè)酶，越來越多的研究證實(shí)端粒酶在正常人體組織中的活性被抑制，而在腫瘤中重新被激活，激活的端粒酶可能參與惡性轉(zhuǎn)化。目前研究表明，激活的端粒酶與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。因此Bmi-1和端粒酶在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中有可能是協(xié)同效應(yīng)。
　　 食管癌是發(fā)生在食管上皮組織的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的2％。我國是食道

6、癌高發(fā)區(qū)，北方較南方多見，其中河南省發(fā)病率最高，其中以食管鱗狀細(xì)胞癌(鱗癌)最多見，發(fā)病年齡大多在40歲以上，但近年來40歲以下發(fā)病者有增長趨勢，發(fā)病年齡有年輕化的趨勢，因此成了近年來我們研究的熱點(diǎn)。關(guān)于Bmi-1和端粒酶各自在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況以及它們與細(xì)胞凋亡的關(guān)系，國內(nèi)外已有報(bào)道，但未見在食管癌組織中同時(shí)檢測Bmi-1和端粒酶的表達(dá)以及與腫瘤細(xì)胞凋亡的關(guān)系報(bào)道，值得進(jìn)一步研究探討。本研究應(yīng)用了免疫組織化學(xué)SP法檢測了Bmi-1和

7、端粒酶在正常食管粘膜上皮組織、癌旁非典型增生組織及食管鱗癌組織中的表達(dá)情況；用TUNEL方法分析了食管鱗癌組織中腫瘤細(xì)胞的凋亡情況，以研究Bmi-1和端粒酶與食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系，同時(shí)探討B(tài)mi-1、端粒酶與食管癌細(xì)胞凋亡的關(guān)系。以期尋找食管癌早期診斷和判斷預(yù)后的分子指標(biāo)。
　　 方法：
　　 1.采用免疫組化SP法分別對(duì)65例食管鱗癌組織、38例癌旁非典型增生組織及25例正常粘膜上皮組織中Bmi-

8、1、端粒酶的表達(dá)進(jìn)行檢測；用TUNEL方法檢測了在食管鱗癌組織中腫瘤細(xì)胞的凋亡情況。
　　 2.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，Bmi-1和端粒酶的表達(dá)強(qiáng)度的比較采用x2檢驗(yàn)，兩變量之間的關(guān)系分析采用spearman等級(jí)相關(guān)分析表示，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)以α=0.05為顯著性檢驗(yàn)水準(zhǔn)。凋亡指數(shù)(apoptosisindex，AI)的比較采用方差分析及t檢驗(yàn)，α=0.05有顯著性意義。
　　 結(jié)果：
　

9、　 1.在正常食管粘膜上皮組織、癌旁非典型增生組織和食管鱗癌組織中，Bmi-1陽性表達(dá)率依次升高，分別為20.00％(5/25)、47.74％(17/38)和64.62％(42/65)，三者兩兩相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在癌組織中，Bmi-1陽性表達(dá)率與年齡、性別、腫瘤的直徑、浸潤深度、分化程度無關(guān)，而與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期有關(guān)。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組Bmi-1陽性表達(dá)率低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(x2=6.460，P=0.0

10、11)；Ⅰ-ⅡA組Bmi-1陽性表達(dá)率低于ⅡB-Ⅲ組(x2=9.432，P=0.002)。
　　 2.在正常食管粘膜上皮組織、癌旁非典型增生組織和食管鱗癌組織中，端粒酶蛋白陽性表達(dá)率依次升高，為12.00％(3/25)、52.63％(20/38)和92.31％(60/65)，三者兩兩相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在癌組織中，端粒酶陽性表達(dá)率與年齡、性別、腫瘤的直徑、浸潤深度、分化程度無關(guān)，而與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、以及TN

11、M分期有關(guān)。無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者端粒酶陽性表達(dá)率低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(x2=8.125，P=0.004)；Ⅰ-ⅡA組Bmi-1陽性表達(dá)率低于ⅡB-Ⅲ組(x2=8.125，P=0.004)。
　　 3.食管鱗癌組織中腫瘤細(xì)胞的凋亡與Bmi-1表達(dá)有關(guān)。Bmi-1陽性表達(dá)組中腫瘤細(xì)胞AI為(5.35±2.33)％，低于陰性表達(dá)組(13.41±5.62)％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 4.食管鱗癌組織中腫瘤細(xì)胞的凋亡與端

12、粒酶表達(dá)有關(guān)。端粒酶陽性表達(dá)組中腫瘤細(xì)胞AI為(6.35±2.33)％，低于陰性表達(dá)組(15.52±5.94)％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 5.Bmi-1、端粒酶在食管鱗癌組織中的表達(dá)相關(guān)性經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示兩者呈正相關(guān)(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.Bmi-1、端粒酶的異常表達(dá)與食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，且兩者可能在食管鱗癌的發(fā)生、發(fā)展中起協(xié)同作用。
　　 2.Bmi-1、端