氧化苦參堿的鎮(zhèn)痛作用及其與GABA能神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)機制的研究.pdf

1、目的：觀察氧化苦參堿（oxymatrine,OMT）的鎮(zhèn)痛作用并探討OMT鎮(zhèn)痛作用涉及的部位及其相關(guān)機制。
　　方法：1.行為藥理學(xué)方法①采用化學(xué)刺激/物理刺激疼痛模型（小鼠醋酸扭體法、小鼠福爾馬林法、溫浴熱水縮尾法），分別測定小鼠痛閾，觀察氧化苦參堿對小鼠痛閾的影響；②采用小鼠S形豎尾實驗和納洛酮催癮實驗，觀察小鼠S形豎尾反應(yīng)和跳躍反應(yīng)，分析氧化苦參堿在有效鎮(zhèn)痛劑量下是否具有成癮性；③采用小鼠溫浴熱水縮尾法，觀察連續(xù)5d給予氧化

2、苦參堿對小鼠的縮尾反射潛伏期的影響，分析小鼠是否對氧化苦參堿產(chǎn)生耐藥性；④通過不同給藥途徑（腹腔注射、側(cè)腦室注射和鞘內(nèi)注射），采用小鼠溫浴熱縮尾法，觀察氧化苦參堿對小鼠縮尾反射潛伏期的影響，分析不同給藥途徑對氧化苦參堿鎮(zhèn)痛作用效果的影響；⑤借助γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyricacid,GABA）、GABA合成酶抑制劑、GABA合成釋放抑制劑以及GABAA受體激動劑和拮抗劑等工具藥研究其對氧化苦參堿鎮(zhèn)痛作用的影響并初步分

3、析氧化苦參堿鎮(zhèn)痛作用的機制。
　　2.應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測氧化苦參堿對小鼠大腦皮層、丘腦、海馬和脊髓背角處GABAA受體免疫陽性細胞的影響，初步定性半定量分析其鎮(zhèn)痛作用與中樞GABAA受體的關(guān)系。
　　3.應(yīng)用Westernblot技術(shù)，檢測氧化苦參堿對福爾馬林致痛小鼠大腦皮層和脊髓背角中GABAA受體蛋白表達的影響，進一步定量分析氧化苦參堿鎮(zhèn)痛作用與大腦皮層和脊髓背角處GABAA受體的關(guān)系。
　　結(jié)果：1.氧化

4、苦參堿對不同疼痛模型的鎮(zhèn)痛作用腹腔注射氧化苦參堿180、90和45mg/kg均可抑制冰醋酸誘發(fā)的小鼠扭體反應(yīng)，最大抑制率可達97.31％；可明顯抑制小鼠福爾馬林實驗兩相反應(yīng)累計舔足時間(P<0.05、0.01)；可延長小鼠溫浴縮尾反應(yīng)潛伏期（P<0.01）且作用效果可以維持90分鐘以上。提示氧化苦參堿具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
　　2.氧化苦參堿的成癮性及耐藥性觀察在小鼠S形豎尾實驗和納洛酮催癮實驗中，氧化苦參堿組小鼠無豎尾反應(yīng)和跳躍反

5、應(yīng)；給予小鼠氧化苦參堿180、90、45mg/kg，給藥后30min測小鼠溫浴縮尾反射潛伏期，連續(xù)5d，小鼠溫浴熱縮尾反射潛伏期未見顯著性差異P﹥0.05。提示氧化苦參堿在鎮(zhèn)痛作用劑量下無成癮性和耐藥性。
　　3.氧化苦參堿的鎮(zhèn)痛作用部位研究側(cè)腦室注射氧化苦參堿4、2和1mg/kg可延長小鼠溫浴熱縮尾反應(yīng)潛伏期（P<0.01），作用效果可持續(xù)90分鐘以上，最大痛閾提高率可達85.64%；鞘內(nèi)注射氧化苦參堿8、4和2mg/kg同樣表

6、現(xiàn)出明顯的鎮(zhèn)痛效果（P<0.05,P<0.01），作用效果可持續(xù)60分鐘以上，最大痛閾提高率為76.59%。提示氧化苦參堿鎮(zhèn)痛作用部位涉及脊髓水平和脊上水平。
　　4.氧化苦參堿與GABA相關(guān)工具藥合用對其鎮(zhèn)痛作用的影響側(cè)腦室注射GABA2mg/kg和GABA合成酶抑制劑L-烯丙基甘氨酸（L-allylglycine，L-AG）2.5mg/kg可分別加強閾下劑量氧化苦參堿（25mg/kg，ip）對溫浴致痛小鼠的縮尾反射潛伏期(P<

7、0.01)；側(cè)腦室注射GABAA受體特異性抑制劑荷包牡丹堿（Bicuculine，BIC）4×10－3mg/kg和GABAA受體非特異性抑制劑印防己毒素（Picrotoxin，PTX）8×10－3mg/kg對閾下劑量氧化苦參堿（25mg/kg）的鎮(zhèn)痛作用也有類似的影響(P<0.01)。腹腔注射閾下劑量3-MP(12.18mg/kg)能對抗氧化苦參堿180mg/kg的鎮(zhèn)痛作用(P<0.05,P<0.01)；提示氧化苦參堿的鎮(zhèn)痛作用與GAB

8、A及GABAA受體有關(guān)。
　　5.氧化苦參堿對小鼠大腦皮層、海馬、丘腦和脊髓背角GABAA受體免疫陽性細胞及其蛋白表達的影響腹腔注射氧化苦參堿180mg/kg可以增加小鼠脊髓背角、大腦皮層及海馬處GABAARα1免疫陽性神經(jīng)細胞數(shù)目增多(P<0.01)，使脊髓后角平均光密度、平均灰度值增加，表達增強(P<0.01)；可以明顯增加福爾馬林致痛小鼠脊髓背角和大腦皮層GABAARα1的蛋白表達。提示中樞GABAA受體參與了氧化苦參堿的鎮(zhèn)