HCV十表位抗原的恒河猴免疫學(xué)效果評價.pdf

1、丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus、HCV)感染導(dǎo)致的慢性肝炎疾病,現(xiàn)在已成為全球性的公共衛(wèi)生問題。鑒于目前對于HCV慢性感染尚無特異性治療方法,且副作用較大,因此研制HCV疫苗對于控制HCV流行具有重要意義。HCV的高度異源性是HCV疫苗研究的重要障礙,通過對來自全球的多株HCV序列分析表明,至少存在6種主要基因型和大約100種基因亞型。由于HCV基因序列存在高度變異性、感染力弱,并且缺乏有效的細胞和動物感染模型,因此采

2、用傳統(tǒng)方法研制丙肝疫苗難以達到目的。多表位疫苗,作為通過篩選與組合優(yōu)勢抗原表位(包括T細胞、B細胞表位)的新型疫苗,能夠產(chǎn)生高效的細胞免疫和體液免疫應(yīng)答進而清除病毒,其優(yōu)勢在于通過選擇最具免疫保護潛力的表位以覆蓋盡量多的病毒亞型和誘導(dǎo)機體全面的抗病毒免疫應(yīng)答,它能有效地應(yīng)付病原微生物的變異,克服主要組織相容性復(fù)合體(MHC)分子的遺傳限制。
　　 本研究選取多個HCV基因型中的十個保守性表位,構(gòu)建了重組抗原多肽CB3的表達基因,

3、并將其連接入載體pBV220進行原核表達,經(jīng)包涵體洗滌、溶解、復(fù)性及離子交換柱純化后,獲得純度較高的目的多肽CB3。
　　 在免疫原性評價研究中,以恒河猴作為實驗動物,從體液免疫和細胞免疫兩個方面對CB3的免疫學(xué)效果進行了評價。本研究分別使用1.5μg和30μg劑量的多肽CB3以0、1、6月的免疫程序免疫恒河猴后,采用ELISA方法檢測到免疫動物體內(nèi)有特異性抗體的產(chǎn)生,ELISPOT檢測到抗原特異性IFN-γ細胞因子。與對照組相

4、比,均有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),且30μg劑量組的免疫應(yīng)答強于15μg組。
　　 在保護性抗體評價方面,本研究采用HCV體外細胞培養(yǎng)模型對免疫后動物血清中的中和抗體進行了檢測。首先將體外轉(zhuǎn)錄得到的HCV JFH-1株基因組RNA轉(zhuǎn)染Huh-7細胞,免疫熒光、Western實驗證明有HCV病毒蛋白表達,實時熒光定量PCR證明有HCV病毒基因組的復(fù)制。在蛋白水平和RNA水平上證實了HCV病毒的產(chǎn)生后,進行體外中和實驗。結(jié)果