膽囊癌肝轉(zhuǎn)移模型建立及高轉(zhuǎn)移細胞亞群的篩選.pdf

1、目的：建立膽囊癌肝轉(zhuǎn)移模型并通過模型篩選高轉(zhuǎn)移亞群細胞，為膽囊癌肝轉(zhuǎn)移研究提供良好的體內(nèi)和體外實驗工具。 方法：GBC-SD細胞在含10％胎牛血清的RPMI1645體外培養(yǎng)、胰蛋白酶分離、生理鹽水制備細胞懸液1×107/ml，4到6周齡裸小鼠脾臟接種建立膽囊癌轉(zhuǎn)移模型；從實驗動物肝轉(zhuǎn)移灶中分離腫瘤細胞，經(jīng)過原代、傳代培養(yǎng)，同樣的方法建立轉(zhuǎn)移模型，進行第二輪和第三輪高轉(zhuǎn)移表型膽囊癌細胞亞群的篩選。光鏡下觀察轉(zhuǎn)移灶和篩選細胞的形態(tài)特

2、征；抽提細胞與實驗動物肝組織DNA，PCR擴增三對人類特異的微衛(wèi)星序列。 結(jié)果：建立了裸小鼠肝臟轉(zhuǎn)移模型，轉(zhuǎn)移灶分布肝實質(zhì)各處，但以邊緣為主。左葉多受侵犯，部分全肝轉(zhuǎn)移。組織學觀察轉(zhuǎn)移病灶為腺癌。第一輪、第二輪、第三輪轉(zhuǎn)移模型在接種后10周、7周、5周形成肉眼轉(zhuǎn)移灶，轉(zhuǎn)移率為60、70、90％。從第三輪轉(zhuǎn)移灶中篩選高轉(zhuǎn)移膽囊癌細胞亞群，命名為GBC-SD/M3。與親代細胞GBC-SD相比，所篩選的GBC-SD/M3在具有相似的形