Feridex標(biāo)記人Flk-1（+）CD31（-）CD34（-）間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的：探討磁共振增強(qiáng)劑超順磁性納米鐵顆粒(Superparamagnetic Iron Oxide，SPIO)Feridex標(biāo)記人Flk-1(+)CD31(-)CD34(-)間充質(zhì)干細(xì)胞(human Mesenchymal Stem Cells，hMSCs)對(duì)其表型、細(xì)胞活性、增殖能力及向神經(jīng)方向分化能力的影響，為磁共振成像技術(shù)追蹤磁標(biāo)記移植細(xì)胞提供可靠的理論依據(jù)。 方法：使用轉(zhuǎn)染劑介導(dǎo)法標(biāo)記，以含F(xiàn)eridex 50μg/ml

2、及多聚賴(lài)氨酸(Poly-lysine，PLL)1.5μg/ml的培養(yǎng)基與hMSCs共同孵育12-18小時(shí)。 Fefidex標(biāo)記后行普魯士藍(lán)染色測(cè)定標(biāo)記率及標(biāo)記效率隨細(xì)胞數(shù)目和時(shí)間產(chǎn)生的變化、透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)鐵顆粒分布。通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)染色、生長(zhǎng)曲線測(cè)定及流式細(xì)胞儀檢測(cè)Feridex對(duì)細(xì)胞活性、生長(zhǎng)能力及細(xì)胞表型的影響。采用化學(xué)誘導(dǎo)法(10mmol/L β-巰基乙醇)及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)法(100ng/ml堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子)在體外誘導(dǎo)hM

3、SCs向神經(jīng)方向分化。免疫熒光方法檢測(cè)誘導(dǎo)后對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組hMSCs神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特異標(biāo)記物NF、MAP-2、GFAP和GalC的表達(dá)，通過(guò)Image-ProPlus 6.0軟件測(cè)定熒光OD值，比較兩組間差異。 結(jié)果：使用含F(xiàn)eridex 50μg/ml及PLL 1.5μg/ml的培養(yǎng)基標(biāo)記hMSCs，標(biāo)記效率可達(dá)96％。電鏡檢測(cè)顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胞內(nèi)可見(jiàn)黑色顆粒，以胞漿為主，細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。標(biāo)記后對(duì)照

4、組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞活性均超過(guò)97％；流式細(xì)胞儀檢測(cè)，對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞CD44、 CD105、Flk-1均為陽(yáng)性，CD31、CD34均為陰性。Feridex標(biāo)記后1周，細(xì)胞生長(zhǎng)能力及活性與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。Feridex標(biāo)記效率隨觀察時(shí)間延長(zhǎng)及細(xì)胞數(shù)目增加而逐步下降?；瘜W(xué)誘導(dǎo)法誘導(dǎo)后兩組細(xì)胞均表達(dá)NF，MAP2及GFAP均為陰性；神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)法誘導(dǎo)后兩組細(xì)胞NF、GFAP、GalC均為陽(yáng)性。兩種方法誘導(dǎo)hMSCs向神經(jīng)方向分化后，