Feridex標記人Flk-1（+）CD31（-）CD34（-）間充質(zhì)干細胞對細胞生物學特性的影響.pdf

1、目的：探討磁共振增強劑超順磁性納米鐵顆粒(Superparamagnetic Iron Oxide，SPIO)Feridex標記人Flk-1(+)CD31(-)CD34(-)間充質(zhì)干細胞(human Mesenchymal Stem Cells，hMSCs)對其表型、細胞活性、增殖能力及向神經(jīng)方向分化能力的影響，為磁共振成像技術追蹤磁標記移植細胞提供可靠的理論依據(jù)。 方法：使用轉染劑介導法標記，以含F(xiàn)eridex 50μg/ml

2、及多聚賴氨酸(Poly-lysine，PLL)1.5μg/ml的培養(yǎng)基與hMSCs共同孵育12-18小時。 Fefidex標記后行普魯士藍染色測定標記率及標記效率隨細胞數(shù)目和時間產(chǎn)生的變化、透射電鏡觀察細胞內(nèi)鐵顆粒分布。通過臺盼藍染色、生長曲線測定及流式細胞儀檢測Feridex對細胞活性、生長能力及細胞表型的影響。采用化學誘導法(10mmol/L β-巰基乙醇)及神經(jīng)營養(yǎng)因子誘導法(100ng/ml堿性成纖維細胞生長因子)在體外誘導hM

3、SCs向神經(jīng)方向分化。免疫熒光方法檢測誘導后對照組及實驗組hMSCs神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞特異標記物NF、MAP-2、GFAP和GalC的表達，通過Image-ProPlus 6.0軟件測定熒光OD值，比較兩組間差異。 結果：使用含F(xiàn)eridex 50μg/ml及PLL 1.5μg/ml的培養(yǎng)基標記hMSCs，標記效率可達96％。電鏡檢測顯示，實驗組細胞胞內(nèi)可見黑色顆粒，以胞漿為主，細胞超微結構與對照組相比無顯著性差異。標記后對照

4、組及實驗組細胞活性均超過97％；流式細胞儀檢測，對照組及實驗組細胞CD44、 CD105、Flk-1均為陽性，CD31、CD34均為陰性。Feridex標記后1周，細胞生長能力及活性與對照組相比無顯著性差異。Feridex標記效率隨觀察時間延長及細胞數(shù)目增加而逐步下降?；瘜W誘導法誘導后兩組細胞均表達NF，MAP2及GFAP均為陰性；神經(jīng)營養(yǎng)因子誘導法誘導后兩組細胞NF、GFAP、GalC均為陽性。兩種方法誘導hMSCs向神經(jīng)方向分化后，