原代間皮細胞移植防治損傷性腹膜粘連的研究.pdf

1、碩士學(xué)位論文M A S T E R ’S D I S S E R T A T I O N論文題目： 原代叫皮細胞移梢防治損傷4 阡腹膜煮l -T 。T L E 連的母『究口，e m 小柚d 一擊d 們m 吣m 血g m l 即?岫u a I 訕m 刪Ⅱ％m l d ?“z u ●e 1 1 m 1 1 湘I p 砷m c m a d ?一級學(xué)科二級學(xué)科臨床醫(yī)學(xué)兒科學(xué)論文作者：吳博指導(dǎo)教師： 谷繼9 目教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院2 0 0

2、7 年5 月。霸；甓，一一，，■一{j』Jjjr ’i i i＼，～端出勘Ⅻ業(yè)掣掣掣些?言手，～，●：；：_-：l_}i扣^茸q，?lJ～j，童掣掣掣毒j罰磊弱一柏一i《爭 熱攀，，lll—iLhPj二FnEPHPiE¨巨．”“ l ㈨o F 琴Ⅳ～i i 川天津醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文論文二 網(wǎng)膜間皮細胞的分離、培養(yǎng)與鑒定摘要：目的通過實驗一我們得出腹膜間皮細胞細胞損傷是造成腹膜粘連的主要原因之一。修復(fù)腹膜間皮細胞，是減輕

3、腹膜粘連的手段之一。為研究腹膜間皮細胞的培養(yǎng)及方法形態(tài)學(xué)功能，我們進行了腹膜間皮細胞的培養(yǎng)。我們?yōu)榇瞬捎昧舜缶W(wǎng)膜消化法，以從大鼠體內(nèi)分離網(wǎng)膜間皮細胞，進行傳代培養(yǎng)及鑒定。方法為尋找消化網(wǎng)膜間皮細胞的最佳胰蛋白酶濃度及時間，分別用0 ．0 6 2 5 ％、0 ．1 2 5 ％、0 ．2 5 ％胰蛋白酶一O ．0 2 ％E D T A N a ：進行5 、1 0 、1 5 分鐘的大鼠網(wǎng)膜消化。通過統(tǒng)計學(xué)運算，得出濃度與時間之間的關(guān)系。同時將

4、離體大網(wǎng)膜按面積不同分為四組，分別為l c m 2 、4 c m 2 、6 c m 2 、9 c m 2 ，計算出在最佳消化時間與最佳消化濃度情況下，消化面積與所得細胞之間的相關(guān)性。收集細胞懸液經(jīng)離心后進行間皮細胞培養(yǎng)；觀察細胞形態(tài)，計算細胞純度；通過免疫組化鑒定細胞。結(jié)果從大網(wǎng)膜消化下的原代間皮細胞光鏡下呈成串葡萄樣，在培養(yǎng)瓶內(nèi)初呈拉網(wǎng)狀生長，融合后的細胞呈多邊形，邊緣不齊，形成鋪路鵝卵石樣外觀。細胞表面標(biāo)志鑒定顯示角蛋白抗原陽性，證

5、實分離培養(yǎng)的確是網(wǎng)膜間皮細胞。通過胰酶濃度與消化時間的正交分析得出以0 ．2 5 ％胰蛋白酶消化大網(wǎng)膜1 0 分鐘所得到的間皮細胞數(shù)量最多，且形態(tài)功能正常。通過相關(guān)性分析得出間皮細胞數(shù)量與大網(wǎng)膜消化面積呈正相關(guān)，( r = O ．9 8 1 ，P = O ．0 1 8 9 < 0 ．0 5 ) ，相關(guān)方程為：Y ( 細胞數(shù))= - 0 ．2 6 0 + 0 ．4 9 7 ×X ( 面積) 。結(jié)論間皮細胞可以通過胰蛋白酶網(wǎng)

6、膜消化法進行培養(yǎng)，0 ．2 5 ％的胰蛋白酶一O ．0 2 ％E D T A N a 。消化1 0 分鐘所得的間皮細胞數(shù)最多，且細胞形態(tài)及功能正常。經(jīng)此種方法培養(yǎng)所得的間皮細胞數(shù)量與消化所用大網(wǎng)膜面積成正相關(guān)。[ 關(guān)鍵詞] 大鼠 網(wǎng)膜間皮細胞分離培養(yǎng)胰蛋白酶濃度論文三原代間皮細胞移植防治損傷性腹膜粘連的研究摘要：目的 腹膜粘連是術(shù)后常見的并發(fā)癥之一，其發(fā)生率可達9 0 ％以上，腹膜損傷、間皮細胞損傷、纖維蛋白滲出、成纖維細胞過度增殖是粘

7、連形成的病生理基礎(chǔ)，而粘連形成的各個環(huán)節(jié)又相互關(guān)聯(lián)。在明確了腹膜粘連形成的細胞學(xué)機制后，有效促進間皮細胞修復(fù)、抑制成纖維細胞過度增殖是防治腹膜粘連的有效方法。為此我們對通過移植間皮細胞防治損傷性腹膜粘連進行了初步探討。方法取健康W i s t a r 大鼠4 0 0 只，隨機分為5 組，每組8 0 只，雌雄各半。進行以下實驗A 組：粘連模型組：單純鉗夾腸壁，制造無菌性損傷模型；B 組：間皮細胞移植組：在A 組基礎(chǔ)上腹腔移植間皮細胞。C