LRP16基因在子宮內(nèi)膜異位癥中可能作用的研究.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥是一種激素依賴性疾病，多發(fā)生于中青年婦女。其發(fā)病機(jī)制尚未被完全闡明，為多數(shù)學(xué)者接納的仍為子宮內(nèi)膜種植學(xué)說，即認(rèn)為子宮內(nèi)膜細(xì)胞隨經(jīng)血逆流至盆腔并種植、生長而發(fā)生EMS。新的觀點認(rèn)為內(nèi)異癥患者子宮內(nèi)膜細(xì)胞的異位種植、侵襲和血管新生等類似惡性腫瘤的生物學(xué)行為是內(nèi)異癥發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制之一。以往的研究發(fā)現(xiàn)LRP16基因是一種具有雌激素依賴性的腫瘤相關(guān)基因，因此，本研究試圖通過探討在子宮內(nèi)膜異位癥中LRP16基因與E-cadher

2、in、ER、PR之間的關(guān)系，來解釋四者在EMS發(fā)生發(fā)展過程中可能起到的作用。同時，本研究通過借助對乳腺癌MCF-7細(xì)胞中骨架蛋白F-actin的觀察，試圖解釋在EMS中，LRP16是否通過改變細(xì)胞骨架蛋白F-actin來介導(dǎo)內(nèi)膜細(xì)胞的遷徙。本研究共分2部分： 一、LRP16、E-cadherin、ER與PR在子宮內(nèi)膜異位癥的表達(dá)及其意義 目的：探討LRP16與E-cadherin、ER、PR在子宮內(nèi)膜異位癥(EM)患者在

3、位和異位內(nèi)膜中的表達(dá)。 方法：采用免疫組化SP二步染色法，對72例EM患者在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜中的LRP16和E-cadherin、ER、PR進(jìn)行免疫組化染色。 結(jié)果：腺上皮細(xì)胞胞漿中LRP16在在位中的表達(dá)高于異位內(nèi)膜(P＜0.05)；胞核中LRP16在在位和異位內(nèi)膜中的表達(dá)沒有明顯差別；腺上皮細(xì)胞胞膜中E-cadherin在在位中的表達(dá)低于異位內(nèi)膜(P＜0.05)。但在位和異位內(nèi)膜中LRP16和E-cadherin的表

4、達(dá)不認(rèn)為存在相關(guān)性(P＞0.05)。腺上皮細(xì)胞核中ER、PR在在位內(nèi)膜中的表達(dá)高于異位內(nèi)膜(P＜0.05)，異位內(nèi)膜中PR的陽性表達(dá)高與胞核中LRP16(P＜0.05)，ER低于LRP16，且ER與胞核中LRP16存在相關(guān)性。在位內(nèi)膜胞核中LRP16高與ER、PR(P＜0.05)。 結(jié)論：LRP16和E-cadherin、ER、PR在在位和異位內(nèi)膜中的表達(dá)異常可能與EM的發(fā)生發(fā)展有關(guān)． 二、免疫熒光方法觀察LRP16蛋白

5、表達(dá)不同的細(xì)胞系中F-actin的情況 目的：探討表達(dá)不同LRP16蛋白的三種細(xì)胞系，即MCF-7細(xì)胞系、MPL-374細(xì)胞系及MPL-GFPi細(xì)胞系中F-actin的情況，進(jìn)而分析LRP16蛋白、F-actin與細(xì)胞遷移間的關(guān)系。 方法：采用免疫熒光方法。用F-actin特異性FITC-phalloidin熒光染料，對三種細(xì)胞進(jìn)行染色，觀察三種細(xì)胞間的不同。 結(jié)果：FITC-halloidin標(biāo)記過的LRP16

6、基因表達(dá)抑制率為90％的MPL-374細(xì)胞、陰性對照的MPL-GFPi細(xì)胞中，細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)、細(xì)胞的拉絲處及細(xì)胞的毛刺狀突起處，可見較強(qiáng)的綠色熒光；而對于穩(wěn)定表達(dá)LRP16基因的MCF-7細(xì)胞，其細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)、細(xì)胞的拉絲處及細(xì)胞的毛刺狀突起處，綠色熒光的強(qiáng)度明顯減弱。 結(jié)論：LRP16基因的高表達(dá)可促進(jìn)F-actin的解聚，使F-actin向G-actin轉(zhuǎn)化。三種細(xì)胞形態(tài)未見明顯不同，可推測F-actin的解聚不足以引起MCF-7細(xì)

7、胞內(nèi)G-actin與F-actin轉(zhuǎn)化平衡的失衡。而MCF-7細(xì)胞中LRP16基因的高表達(dá)導(dǎo)致F-actin向G-actin轉(zhuǎn)化的變化，引起細(xì)胞拉絲的改變，可能導(dǎo)致細(xì)胞間相互作用的改變，從而使得細(xì)胞易于發(fā)生遷移。 全文結(jié)論： 1、LRP16在胞漿和胞核同時有表達(dá)，且異位內(nèi)膜胞漿中LRP16的表達(dá)低于在位內(nèi)膜，而在位內(nèi)膜胞漿中的表達(dá)高于胞核中。 2、異位內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞胞核中LRP16的陽性表達(dá)高與E-cadheri

8、n，而在位內(nèi)膜中無差別，同時，當(dāng)LRP16在胞核中著色時，異位與在位間的表達(dá)無明顯差別，異位內(nèi)膜中E-cadherin的表達(dá)明顯高于在位內(nèi)膜，由此可推測，在在位內(nèi)膜中存在LRP16與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)的趨勢。ER與PR在在位與異位內(nèi)膜中的不同表達(dá)，以及與LRP16表達(dá)的異常，提示它們之間可能存在著一定的相互關(guān)系，通過相互作用導(dǎo)致彼此的表達(dá)變化，從而在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生中起作用。 3、MCF-7細(xì)胞中LRP16基因