HPV基因分型與子宮頸鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的分子病理機(jī)制初探.pdf

1、為探討人乳頭瘤病毒（Human papilloma virus，HPV）基因分型與子宮頸鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的分子病理機(jī)制，本課題進(jìn)行了以下研究：HPV基因分型在宮頸細(xì)胞學(xué)篩查中的應(yīng)用及意義；子宮頸癌及其癌前病變中HPV感染及其基因型分布；HPV感染相關(guān)子宮頸癌和癌前病變中細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)特征及規(guī)律；HPV16 E6、E7癌基因在轉(zhuǎn)錄水平沉默的途徑及沉默后細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)變化。
　　收集2050例本院婦科門診送檢的宮頸脫落細(xì)胞，

2、進(jìn)行HPV基因分型檢測；收集整理子宮頸癌及癌前病變和慢性宮頸炎石蠟組織標(biāo)本，通過 HE閱片篩選出129例標(biāo)本入組，分為子宮頸鱗癌(squamous carcinoma of the cervix, SCC)組、宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)組、慢性宮頸炎組；應(yīng)用PCR-反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行子宮頸癌與癌前病變 HPV基因分型檢測，檢測數(shù)據(jù)用 SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析；選

3、取79例宮頸病變石蠟標(biāo)本進(jìn)行p16、p21、p53、Rb、CyclinD1等指標(biāo)免疫組化（SP法）染色；采用免疫組化、RT-PCR、Western blot技術(shù)檢測子宮頸癌HCC94、SiHa細(xì)胞中p16、p21、p53、Rb、CyclinD1基因及其蛋白表達(dá)，利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)研究SiHa E6、E7基因瞬時沉默后細(xì)胞凋亡以及關(guān)鍵信號分子p16、p21、p53、Rb、CyclinD1、ki67的表達(dá)情況。
　　2050例宮頸上皮細(xì)

4、胞標(biāo)本中HPV感染陽性率為25.85％(530/2050)，最常見的類型依次為16、6、58、52、43型；109例子宮頸癌及其癌前病變標(biāo)本中HPV陽性率為100％，最常見的基因型為HPV16型；隨著病變程度的增加HPV單一感染比例逐漸升高，多重感染比例逐漸下降；p16蛋白在HPV(+)的子宮頸癌及其癌前病變中呈現(xiàn)過表達(dá)，在HPV(-)的正常組織中不表達(dá)；p53蛋白在正常宮頸組織中不表達(dá)，在SCC中偶見表達(dá)；Rb蛋白在正常宮頸鱗狀上皮基

5、底細(xì)胞中表達(dá)，在CIN與SCC中表達(dá)缺失；CyclinD1蛋白在正常宮頸組織和CINⅠ中表達(dá)，部分CINⅡ、CINⅢ、SCC中表達(dá)缺失；在HPV16(+)SiHa細(xì)胞中，p16表達(dá)在mRNA和蛋白水平均高于HPV(-)的HCC94細(xì)胞，而CyclinD1表達(dá)在mRNA和蛋白水平均低于HCC94細(xì)胞；應(yīng)用RNAi技術(shù)可以將SiHa細(xì)胞中HPV16 E6、E7基因沉默，沉默效率可達(dá)70%以上，沉默后E6、E7 mRNA和蛋白表達(dá)同步下降，細(xì)

6、胞凋亡率上升，Ki67基因表達(dá)下降， p21基因表達(dá)上升。
　　宮頸細(xì)胞HPV基因分型對宮頸癌的早期篩查診斷具有重要意義；宮頸鱗癌及癌前病變發(fā)生與HPV感染直接相關(guān)，是高低危HPV亞型共同作用的結(jié)果，且高危型HPV持續(xù)感染是子宮頸癌及高級別癌前病變發(fā)生的必要條件；HPV16型病毒感染是國人子宮頸鱗癌形成的主要原因；p16、p21、p53、Rb、CyclinD1基因及蛋白的表達(dá)水平與HPV感染關(guān)系密切，其中子宮頸癌及其癌前病變中可見