甲氨蝶呤聯(lián)合環(huán)磷酰胺對大鼠毒副作用和細胞周期、DNA損傷作用機制的實驗研究.pdf

1、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是高度致殘性自身免疫性疾病，改善病情抗風(fēng)濕藥物(DMARDs)的聯(lián)合用藥仍然是RA治療的主流。 由于RA有許多類似腫瘤的特點，如滑膜細胞和淋巴細胞的細胞周期失控、凋亡異常等。近年來，造血干細胞移植、抗CD20單克隆抗體治療難治性RA，均是源于血液病治療的成功經(jīng)驗。腫瘤聯(lián)合化療的理論依據(jù)是選用作用于不同細胞周期的藥物進行聯(lián)合。鑒于此，本研究在治療RA的臨床實踐中，依據(jù)腫瘤聯(lián)合化療的理論，聯(lián)合細胞周期特異性藥物(

2、MTX)與周期非特異性藥物(CTX)小劑量間歇給藥治療RA，回顧性分析資料顯示聯(lián)合組較小劑量單用藥組療效顯著(緩解率80％)，而副作用無明顯增加。分析我們實驗性治療RA療效好、副作用小的原因。 基于以往臨床實踐的基礎(chǔ)設(shè)計了本研究。由于RA的治療是長期的，而RA相關(guān)的關(guān)節(jié)炎大鼠模型在給藥后存活期難以保證。所以為了驗證長期給藥后聯(lián)合方案的毒副作用及聯(lián)合作用機制，本研究對正常大鼠進行了長達27周的實驗研究。 [研究目的]：

3、 ①通過檢測不同劑量MTX、CTX單獨或聯(lián)合用藥后對血常規(guī)、肝、腎功能和相應(yīng)臟器病理變化的影響，探討聯(lián)合方案的毒副作用。 ②應(yīng)用單細胞凝膠電泳技術(shù)(SCGE)，以彗尾長度和慧星頻率作為觀測指標(biāo)，檢測不同劑量MTX、CTX單獨或聯(lián)合用藥后對大鼠肝臟、腎臟細胞的DNA損傷，進一步探討聯(lián)合組的毒副作用機制。同時檢測對大鼠PBL、骨髓、脾臟淋巴細胞的DNA損傷，探討MTX、CTX可能的聯(lián)合作用機制。 ③通過流式細胞術(shù)(FCM

4、)檢測脾臟、骨髓及PBL在細胞周期的各期細胞比例及G1期細胞周期蛋白(cyclin)D1，探討聯(lián)合方案對脾臟、骨髓、PBL細胞周期和cyclin D1的影響是否具有協(xié)同作J}j，探討是否通過影響脾臟、骨髓、PBL的cyclin D1途徑實現(xiàn)對細胞周期的影響。 [結(jié)淪]： 1.MTX聯(lián)合CTX小劑量間歇給藥與單用藥比較毒副作用并沒有增加，比較安全。CTX隔同給藥組的毒副作用明顯大于其它各組。表現(xiàn)為體重不增、意外死亡大鼠數(shù)量

5、明顯增多、肝臟、腎臟病理變化嚴(yán)重。 2.生化指標(biāo)ALT、AST、BUN、Cr并不能及時地反映肝臟、腎臟早期病理改變。SCGE檢測PBL的DNA損傷與盯臟、腎臟的DNA損傷和肝、腎病理改變有明顯的相關(guān)性，初步推測可以作為檢測藥物副作用的敏感指標(biāo)。 3.CTX對PBL、骨髓、脾臟淋巴細胞DNA的損傷遠重于MTX。PBL的DNA損傷越嚴(yán)重，PBL計數(shù)越少。推測CFX通過對細胞DNA損傷引起PBL數(shù)量下降。MTX聯(lián)合CTX對PB

6、L、骨髓、脾臟淋巴細胞DNA的損傷與小劑量CTX組比較有增加趨勢。 4.MTX單獨使用使PBL、骨髓、脾臟細胞S期細胞比例明顯降低，主要通過影響細胞G0/G1→S期的轉(zhuǎn)換發(fā)揮作用，進一步驗證MTX為周期特異性藥物。CTX單獨使用對細胞各期比例影響較小，CTX作為細胞周期非特異性藥物，主要通過細胞的DNA損傷發(fā)揮作用。 5.MTX單獨使用使G0/G1期細胞比例增高，CTX單獨使用使G0/G1期細胞比例輕度增高，但兩藥聯(lián)合使