5-氮雜胞苷誘導(dǎo)培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞的膜離子通道的改變及其機理研究.pdf

1、目的：了解5-氮雜胞苷誘導(dǎo)培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細胞向心肌樣細胞分化過程中的膜離子通道的改變并探討其機理。 方法：按文獻方法獲得和培養(yǎng)Sprague-Dawley大鼠骨髓間充質(zhì)（Mesenchymal stem cells，MSCs）干細胞，培養(yǎng)干細胞至第2周時部分骨髓MSCs以10μmol/L5-氮雜胞苷（5-Azacytidine，5-Aza）誘導(dǎo)后再培養(yǎng)4周，以全細胞膜片鉗技術(shù)檢測誘導(dǎo)培養(yǎng)第1、2、3、4周和未誘導(dǎo)培養(yǎng)第6周M

2、SCs的膜電流性質(zhì)以及電流密度的大小。電流檢測時各周隨機封測30例MSCs，其中10例用含鈉檢測液檢測以便于研究細胞表達的所有電流種類，20例以無鈉檢測液檢測以便于研究其表達的K+電流密度的大小。同時免疫組織化學(xué)分別檢測誘導(dǎo)與非誘導(dǎo)培養(yǎng)MSCs心肌特異性T型肌鈣蛋白（Cardiac troponin T，cTnT）和縫隙連接蛋白（Gap junction protein43，Cx43）的表達。 結(jié)果： （1）電流檢測結(jié)果

3、： ①未誘導(dǎo)和誘導(dǎo)后各周MSCs均檢測到延遲整流鉀電流（Delayed rectifier K+ current，IkDR）、瞬時外向鉀電流（Transient outward K+current，Ito）和內(nèi)向整流鉀電流（Inward rectifier K+ current，Ikir）單獨或復(fù)合存在，表達不均一，各周三種鉀電流檢出率相近。 ②未誘導(dǎo)培養(yǎng)6周和誘導(dǎo)后第1周MSCs沒有鈉電流（Sodium current

4、，INa）及鈣電流（Calcium current，ICa）表達，而在誘導(dǎo)第2周開始各周均有INa和ICa單獨或復(fù)合表達。 ⑧誘導(dǎo)后第1周MSCs三種K+電流強度與未誘導(dǎo)組比較無明顯差異，而從誘導(dǎo)第2周起開始增強（p<0.05），至第4周時進一步增強（p<0.01）。 ④誘導(dǎo)培養(yǎng)組MSCs三種K+電流均隨培養(yǎng)時間延長逐漸增強（p<0.05）。 （2）免疫組化檢測結(jié)果：未誘導(dǎo)培養(yǎng)MSCs的cTnT和Cx43無表達，