煙酰胺聯(lián)合堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子體內(nèi)誘導(dǎo)骨髓干細(xì)胞治療大鼠糖尿病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 當(dāng)今，糖尿病已成為患病人數(shù)眾多并極具破壞性的疾病。目前主要是以口服抗高糖藥物及胰島素治療為主。而干細(xì)胞治療糖尿病已經(jīng)進(jìn)入人們的視野，諸多的研究已表明，干細(xì)胞治療糖尿病，尤其是1型糖尿病，已取得初步成果，成為有希望治愈糖尿病的療法。其中骨髓干細(xì)胞(Bone marrow stem cells，BMSCs)因其具有較強(qiáng)的可塑性并易于獲得，所以應(yīng)用前景廣闊。目前已有關(guān)于BMSCs在體外向胰島素分泌細(xì)胞(Insulin-p

2、roducing cells，IPCs)分化的報(bào)道。但在體外條件下誘導(dǎo)分化干細(xì)胞存在易污染及致瘤性等問題，因此，本研究探討煙酰胺(Nicotinamide，N)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Basic fibroblast growth factor，bFGF)在STZ致糖尿病大鼠體內(nèi)能否誘導(dǎo)BMSCs分化為IPCs，從而對(duì)糖尿病大鼠起到治療作用。
　　 材料和方法:
　　 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理
　　 40只雄性S

3、D大鼠按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為兩組：健康對(duì)照組(10只)和造模組（30只）。造模組大鼠一次性腹腔注射2％鏈脲佐菌素(STZ)55mg/kg，建立STZ糖尿病大鼠模型，隨機(jī)分為糖尿病未治療組、單純動(dòng)員組和動(dòng)員并誘導(dǎo)組，每組10只。其中單純動(dòng)員組和動(dòng)員并誘導(dǎo)組分別皮下注射10μg/kg.d重組人粒細(xì)胞集落刺激因子（thG-CSF，商品名特爾津），連續(xù)15天，健康對(duì)照組和糖尿病未治療組給予相當(dāng)劑量的生理鹽水皮下注射。動(dòng)員并誘導(dǎo)組自注射thG-CS

4、F第2天起給予煙酰胺800mg/kg.d灌胃及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1050U/只d腹腔注射，連續(xù)14天，健康對(duì)照組、糖尿病未治療組和單純動(dòng)員組給予同等劑量的生理鹽水灌胃及腹腔注射。
　　 二、生化指標(biāo)的檢測(cè)及方法
　　 整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，各組大鼠每周測(cè)一次體重及血糖。治療前和實(shí)驗(yàn)終止時(shí)各取血測(cè)血清胰島素一次(ELISA法)，實(shí)驗(yàn)終止時(shí)10％水合氯醛3ml/kg腹腔注射麻醉，取胰腺、肝臟和脾臟，用免疫組織化學(xué)染色(SABC法)

5、檢測(cè)其中胰島素染色陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。圖像采集分析系統(tǒng)對(duì)各組大鼠胰腺組織中胰島素染色陽(yáng)性細(xì)胞面積占胰島面積百分比進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果:
　　 一、生化檢測(cè)結(jié)果
　　 治療前，糖尿病未治療組、單純動(dòng)員組及動(dòng)員并誘導(dǎo)組大鼠血糖、血清胰島素?zé)o顯著性差異。治療2周時(shí)，動(dòng)員并誘導(dǎo)組大鼠血糖低于糖尿病未治療組及單純動(dòng)員組(P＜0.05)，但仍高于健康對(duì)照組(P＜0.05)；治療4周時(shí)，動(dòng)員并誘導(dǎo)組血糖低于糖尿病未治療組及單純動(dòng)員

6、組，但高于健康對(duì)照組(P＜0.05)；單純動(dòng)員組大鼠的血糖、血清胰島素與糖尿病未治療組無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，動(dòng)員并誘導(dǎo)組血清胰島素水平高于糖尿病未治療組及單純動(dòng)員組(P＜0.05)，但低于健康對(duì)照組(P＜0.05)。治療2周時(shí)，糖尿病未治療組大鼠體重低于健康對(duì)照組(P＜0.05)但與單純動(dòng)員組及動(dòng)員并誘導(dǎo)組大鼠相比無(wú)顯著差異(P＞0.05)，治療4周時(shí)糖尿病未治療組、單純動(dòng)員組大鼠體重低于健康對(duì)照組(P＜0.05)而動(dòng)員并誘導(dǎo)組

7、與健康對(duì)照組、糖尿病未治療組及單純動(dòng)員組大鼠體重并無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　 二、免疫組織化學(xué)及圖像分析結(jié)果
　　 實(shí)驗(yàn)終止時(shí)免疫組織化學(xué)檢測(cè)胰腺中胰島素陽(yáng)性細(xì)胞百分比發(fā)現(xiàn)健康對(duì)照組明顯高于其他各組(P＜0.01)，動(dòng)員并誘導(dǎo)組低于健康對(duì)照組但是明顯高于糖尿病未治療組(P＜0.01)及單純動(dòng)員組(P＜0.01)，而糖尿病未治療組及單純動(dòng)員組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。在動(dòng)員并誘導(dǎo)組的肝臟和脾臟中發(fā)現(xiàn)胰島素染色