七氟醚預(yù)先吸入誘導(dǎo)HO-1表達(dá)對(duì)急性肺損傷大鼠肺內(nèi)炎癥反應(yīng)的影響.pdf

1、第一部分 不同濃度七氟醚預(yù)先吸入對(duì)ALI大鼠炎癥反應(yīng)的影響 目的： 采用不同濃度七氟醚預(yù)先吸入LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷大鼠，觀察其對(duì)肺臟的ICAM-1和CINC-1 mRNA及其蛋白表達(dá)的影響。 方法： 48只雄性SD大鼠，腹腔注射20％烏拉坦1g/kg麻醉，氣管切開(kāi)插管行機(jī)械通氣30min后，隨機(jī)分成6組（每組8只）： （1）對(duì)照組（A組）；（2）單純七氟醚吸入組（B組）；（3）1.5MAC七氟醚

2、+LPS組（C組）；（ 4）1.0MAC七氟醚+LPS組（D組）；（5）0.5MAC七氟醚+LPS組（E組）；（6）內(nèi)毒素組（F組）。F組機(jī)械通氣30min后經(jīng)股靜脈注射LPS5mg/kg；A組機(jī)械通氣30min后予股靜脈注射等量生理鹽水；B組吸入1.5 MAC七氟醚30min后予股靜脈注射等量生理鹽水，C、D、E組于股靜脈注射LPS5mg/kg前分別吸入1.5、1.0、0.5MAC七氟醚30min。直接動(dòng)脈測(cè)壓監(jiān)測(cè)MAP，記錄并監(jiān)測(cè)基

3、礎(chǔ)狀態(tài)T0（吸七氟醚前即刻）、實(shí)驗(yàn)30min（吸七氟醚后即刻）T1、150min（給LPS后2h）T2、390min（給LPS后6h）T3四個(gè)時(shí)點(diǎn)MAP、動(dòng)脈血?dú)猓?h后放血活殺大鼠，取肺組織分別測(cè)濕干重比（W/D）、HE染色行肺組織病理學(xué)評(píng)分；檢測(cè)肺組織勻漿MPO活性；免疫印記（Western blotting）法檢測(cè)肺組織ICAM-1、CINC-1蛋白的表達(dá)，RT-PCR法檢測(cè)CINC-1、ICAM-1 mRNA的表達(dá)。 結(jié)

4、果： （1）與A組比較：注射LPS各組（C、D、E、F組）肺組織W/D值均呈現(xiàn)不同程度增加（P<0.05）；組織病理形態(tài)學(xué)積分亦明顯增高（P<0.05）。與F組比較：C、E組W/D值差異無(wú)顯著性（P>0.05），D組W/D值下降明顯（P<0.05）：C、D、E三組病理形態(tài)學(xué)積分明顯減少（P<0.05），且D組下降最明顯。單純七氟醚吸入未引起明顯肺臟病理形態(tài)學(xué)改變（P>0.05）； （2）與A組比較：注射LPS各組（C、D

5、、E、F組）肺組織MPO活性升高，肺組織ICAM-1、CINC-1mRNA及其蛋白表達(dá)明顯增加（P<0.05）；但七氟醚預(yù)先吸入組（C、D、E組）MPO活性和ICAM-1mRNA、CINC-1mRNA及其蛋白表達(dá)比F組低（P<0.05），且以C、D組明顯，但C、D兩組比較無(wú)差異（P>0.05），C、D兩組與E組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 （3）單純1.5MAC七氟醚吸入對(duì)肺組織MPO活性、ICAM-1、CINC-1m

6、RNA及蛋白表達(dá)均無(wú)明顯影響，與A組比較無(wú)差異（P>0.05）。 結(jié)論： （1）股靜脈注射LPS5mg/kg可成功復(fù)制ALI大鼠模型： （2）不同濃度七氟醚預(yù)先吸入均能不同程度減輕LPS所致ALI肺部炎癥反應(yīng)，其中以1.0MAC七氟醚為較適宜的吸入濃度。 第二部分 七氟醚預(yù)先吸入對(duì)ALI大鼠肺組織HO-1表達(dá)的影響 目的： 采用1.0MAC七氟醚預(yù)先吸入LPS誘導(dǎo)的ALI大鼠，觀察HO-1

7、在肺組織中的表達(dá)和意義。 方法： 48只雄性SD大鼠，腹腔注射20％烏拉坦1g/kg麻醉，氣管切開(kāi)插管行機(jī)械通氣并維持至處死大鼠。機(jī)械通氣20min后，大鼠隨機(jī)分成6組（每組8只）：（1）對(duì)照組（A組）；（2）ZnPP預(yù)處理組（B組）；（3）單純1.0MAC七氟醚預(yù)先吸入組（C組）；（4）1.0MAC七氟醚+LPS組（D組）；（5）ZnPP+1.0MAC七氟醚+LPS組（E組）；（6）LPS組（F組）。分組后B、E組股靜

8、脈注入ZnPP（10mg/ kg，10g·L-1），其余各組分別注入1ml/kg等體積生理鹽水。10min后，C、D、E三組分別吸入1.0MAC七氟醚30min，D、E、F經(jīng)股靜脈注入LPS5 mg/kg，其余各組注射等體積生理鹽水。6h后放血處死大鼠，留取肺組織標(biāo)本，分別測(cè)濕干重比（W/D）、HE染色行肺組織病理學(xué)評(píng)分；檢測(cè)肺組織MPO和HO-1活性；免疫印跡（Western blotting）法檢測(cè)肺組織ICAM-1、CINC-1、

9、HO-1蛋白的表達(dá)，RT-PCR法檢測(cè)CINC-1、ICAM-1和HO-1mRNA的表達(dá)。 結(jié)果： （1）單純ZnPP預(yù)處理組（B組）、單純七氟醚吸入組（C組）對(duì)肺組織W/D、病理學(xué)積分、MPO和HO-1活性、CINC-1、ICAM-1和HO-1的表達(dá)均沒(méi)有明顯影響，與對(duì)照組（A組）比較，差異均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）； （2）與A組比較：注射LPS各組（D、E、F組）肺組織W/D均增加（P<0.05）；肺

10、組織病理形態(tài)學(xué)積分均明顯增高（P<0.05）。D組損傷較E、F組輕（P<0.05）； （3）與A組比較：注射LPS各組（D、E、F組）肺組織勻漿MPO活性升高，ICAM-1、CINC-1mRNA及其蛋白表達(dá)明顯增加（P<0.05）。七氟醚預(yù)先吸入組（D組）MPO活性、ICAM-1、CINC-1mRNA及其蛋白表達(dá)均比E、F組低（P<0.05）；E組高于F組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 （4）注射LPS后F組HO-

11、1活性、HO-1mRNA及其蛋白表達(dá)增加，與A組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；而D組HO-1活性、HO-1mRNA及其蛋白表達(dá)較F組進(jìn)一步增加（P<0.05）； E組HO-1活性、HO-1mRNA及其蛋白表達(dá)較D組和F組均低（P<0.05）。 結(jié)論： （1）肺組織HO-1的表達(dá)對(duì)ALI具有保護(hù)作用； （2）上調(diào)HO-1表達(dá)是七氟醚抑制ALI肺內(nèi)炎癥反應(yīng)的作用機(jī)制之一； （3）HO-1特異性抑制劑